$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
קחו עובר עכבר במאגר והפרידו את הגולגולת כדי לבודד את המוח.
הסר את קרומי המוח, השכבה הקרומית המכסה את המוח.
נתח את המוח כדי להפריד בין ההמיספרות.
בודד את הטלנצפלונים האחוריים מההמיספרות והעבר אותם לצינור.
הטלנצפלונים הדורסולטרליים עשירים בתאי עצב ותאי אב עצביים.
צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.
הוסף תמיסת אנזים. האנזימים מפרקים את מטריצת הרקמות ומשחררים את התאים.
הכניסו מדיום התפשטות המכיל סרום. חלבוני הסרום מעכבים את פעילות האנזים.
השתמש בפיפטה כדי לנתק את הרקמה באופן מכני וליצור תרחיף תאים.
צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט המכיל אנזימים מומתים ופסולת רקמות.
השעו מחדש את התאים במדיום ההתפשטות.
העבירו את התאים למיקרו-צלחת מצופה מצע תרבית תאים.
דגירה כדי שהתאים ידבקו למצע. המדיום מקל על התפשטות תאי אב.
התחל בהסרת המוחות מ-5 עד 10 עוברי E14 בצלחת פטרי עם מדיום דיסקציה קרה. השתמש במלקחיים כדי לשלוף בזהירות את העור והגולגולת, ולבודד את המוח. תוך כדי עבודה תחת הסטריאומיקרוסקופ, השתמש במלקחיים לדיסקציה כדי להסיר את קרומי המוח. לאחר מכן, פצלו את הטלנצפלון באמצע כדי להפריד בין ההמיספרות.
כדי לבודד את הטלנצפלון הגבי הצדדי שנחתך לאורך העקומה הגבית והגבול הפליאלי-תת-פליאלי. העבירו את הטלנצפלון האחורי לצינור של 2 מיליליטר עם מדיום דיסקציה על הקרח עד שכל המוחות מנותחים. לאחר מיקרו-דיסקציה של הטלנצפלון האחורי, הנח את הרקמה בצינור חרוטי של 15 מיליליטר.
לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינור המכיל את הרקמה שנאספה ואת מדיום הדיסקציה הקרה למשך 5 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ו-340 פעמים גרם כדי לזרז את הרקמה. לאחר הסיבוב, הסר את הסופרנטנט עם הפיפטה, והוסף 1 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס 0.05% טריפסין-EDTA לעיכול כימי. דגירה למשך 15 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס.
לאחר הדגירה, הוסף 2 מיליליטר של מדיום התפשטות כדי לעכב את פעילות הטריפסין. לאחר מכן, יש ללטש את קצה פיפטת פסטר מזכוכית מעל מבער גז או מבער בונסן למשך מספר שניות כדי לצמצם מעט את הצמצם. שאפו FCS לציפוי קצה הפיפטה. לאחר מכן, נתק מכנית את התאים עם פיפטת פסטר מלוטשת אש ומצופה FCS על ידי פיפטינג למעלה ולמטה תוך הקפדה להימנע מיצירת בועות.
צנטריפוגה את התאים המנותקים למשך 5 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ופי 340 גרם. הסר את הסופרנטנט בעזרת פיפטה. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של מדיום התפשטות והשהה מחדש את התאים באמצעות פיפטה. הסר את ה- PBS מהצלחת המטופלת מראש עם פולי-D-ליזין. לאחר מכן, צייר שלט בתחתית הצלחת שיכול לשמש כהתייחסות לקביעת נקודת האפס.
לאחר השעיית התאים במדיום התפשטות בפעם השנייה, הכינו דילול של 1 ל-1 של תרחיף התאים באמצעות תמיסה כחולה של 0.4%. טען לשקופיות תא הספירה וספור את מספר התאים הלא מוכתמים. תאים שאינם ברי קיימא יהיו כחולים. לדלל את התאים במדיום התפשטות כדי לקבל 106 תאים למיליליטר. הוסף 500 מיקרוליטר של תרחיף התאים לכל באר של צלחת תרבית רקמה של 24 בארות ודגר תאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני.