בידוד נוירונים חושיים וטיפוח משותף עם תאי הרג טבעיים

קח גנגליון שורש גבי או DRG, מקבץ של נוירונים חושיים, במדיום קר המכיל סרום כדי להגן על הנוירונים במהלך העיבוד שלאחר מכן.

צנטריפוגה, ואז הסר את הסופרנטנט.

הוסיפו חוצץ פוספט המכיל אנזימי עיכול ודגרו בערבוב קל.

האנזימים מפרקים את המטריצה החוץ-תאית, או ECM, ואת רקמת ה-DRG, ומשחררים את התאים.

הוסף מדיום המכיל סרום כדי לנטרל את האנזימים.

צנטריפוגה, ואז השליכו את הסופרנטנט.

השהה מחדש את ה-DRG ונתק את הרקמה באופן מכני באמצעות פיפטות בגדלים קטנים יותר בהדרגה כדי להשיג תרחיף תאים.

שכבו את התאים על שיפוע צפיפות של אלבומין בסרום בקר.

צנטריפוגה. הנוירונים מתיישבים לקרקעית ויוצרים כדור.

השליכו את השכבות המכילות פסולת רקמות.

השעו מחדש את הנוירונים במדיום תרבותי.

הוסיפו את הנוירונים לצלחת תרבית מצופה ECM ודגרו.

הסר את המדיום והוסף תאי הרג טבעיים או תאי NK.

הוסף מדיום לתרבית משותפת וחקור את האינטראקציה בין תאים אלה.

קצרו את ה-DRGs לתוך צינור חרוטי של 15 מיליליטר מלא ב-10 מיליליטר DMEM קר כקרח. לאחר מכן, צנטריפוגה את התכשיר למשך 5 דקות בחום של 200 גרם בטמפרטורת החדר, והסר את הסופרנטנט. הוסף גם 250 מיקרוליטר PBS המכילים 1 מיליגרם למיליליטר קולגנאז IV ו-2.4 יחידות למיליליטר Dispase. דגרו את ה-DRG הזה עם תמיסת קולגנאז דיספאז למשך 80 דקות עם תסיסה קלה.

כדי לנטרל את האנזימים, הוסף 5 מיליליטר של מדיום DMEM