התמיינות של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים לתאי אב עצביים

קח מיקרו-פלטה המכילה תרבית דביקה של פיברובלסטים עובריים של עכבר, או MEFs, במדיום.

ה-MEFs המודבקים מתפקדים כשכבת הזנה, ומספקים מיקרו-סביבה תומכת של תרבית תאים.

הסר את המדיום והכנס תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים, או hiPSCs, למדיום hiPSC בתוספת מולקולות קטנות המשפרות את הישרדות התאים.

דגירה כדי לאפשר ל-hiPSCs להיצמד לשכבת ההזנה, המפרישה גורמי גדילה המאפשרים את התפשטות ה-hiPSC.

הסר את המדיום והוסף תמיסת אנזים לניתוק התאים. העבירו את התאים וצנטריפוגות אותם, ואז הסירו את הסופרנטנט והשעו אותם מחדש בתווך ה-hiPSC.

העבירו את התאים לצלחת מצופה ביופולימר. דגירה כדי לאפשר ל-MEFs להיצמד.

העבירו את ה-hiPSCs התלויים למיקרו-פלטת V תחתונה. צנטריפוגה של התאים ודגירה עליהם, וגורמת להיווצרות אגרגט תאים.

מלאו במדיום בידול. חומרי המזון של המדיום והאינטראקציות בין תאים בתוך הצבר מקלים על התמיינות hiPSC לתאי אב עצביים.

עבור פרוטוקול זה, התחל בהקמת תאי הזנה. כדי לבסס תרבית זו, צלחו 600,000 תאי הזנה לכל באר של צלחת של שש בארות, עם 300 מיליליטר מדיום לבאר. לאחר תרבית תאי ההזנה במשך 48 שעות, החליפו את המדיום, ודגרו על הצלחות למשך שעה, תוך הכנת תאי הגזע.

הפשירו את תאי הגזע באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, העבירו את התאים לצינור חרוטי של 15 מיליליטר ומלאו את הצינור ל-5 מיליליטר במדיום תרבית, בתוס