פיתוח ותחזוקה של גופים עובריים ללא סרום

התחל עם תא אב עצבי המכיל היטב או אגרגטים NPC בהבחנה בין מדיה-1 או DM-1.

NPCs אלה הם מבשרי שושלת עצבית הנוצרת מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם או hiPSCs המשתמשים ב-DM-1 בתנאים מבוקרים.

העבירו את אגרגטי ה-NPC על גבי תוספת ממברנה המונחת בתוך באר המכילה DM-1 והסר עודפי מדיה.

שנה את המדיום ל-DM-2 ודגירה.

DM-2 מספק חומרים מזינים וגורמי התמיינות המקדמים את התבגרותם של NPCs לסוגי תאים עצביים שונים.

NPCs לא מובחנים הופכים לגופים עובריים, הידועים כגופים עובריים נטולי סרום או SFEBs, מכיוון שהמדיה חסרה סרום. EBs אלה דומים למורפולוגיה של מוח מתפתח.

מעבירים את התוספת לבאר המכילה DM-3.

DM-3 מכיל גורמי גדילה החיוניים לתחזוקה וצמיחה של SFEBs.

דגירה עד ש-SFEBs יגיעו לגודל הרצוי.

לאחר שבועיים של תרבית התאים, הכינו צלחות של שש בארות עם תוספות תרבית תאים של 40 מיקרון, ו-1 מיליליטר של מדיום DM1. דגרו על צלחות אלה לפחות ארבע שעות לפני הוספת התאים המתורבתים.

לאחר מכן, בעזרת קצה פיפטה רחב פה של 200 מיקרוליטר, אספו אגרגטים של תאים בני שבועיים עם כ -20 מיקרוליטר מדיום. העבירו ארבעה עד שישה אגרגטים על כל תוספת עם תמיסה מינימלית. הסר עודפים.

במהלך שלב זה, חשוב לעבוד במהירות וביד יציבה. בעת הסרת מדיום מסביב ל-SFEBs, ייתכן שתראה את ה-SFEBs נעים על פני התמיסה עקב מתח פנים. זה בסדר למקם אותם מחדש לאחר הסרת המדיום.

לאחר טעינת כל האגרגטים על תוספות, שנה את המדיום ל-1 מיליליטר של DM2 והמשך לתרבת את התאים. כל יומיים החלף 3/4 מהמדיום במדיום טרי. לאחר 14 יום של תרבית, התחל להוסיף מדיום DM3 לתרביות. המשיכו בתרבית במשך 16 ימים נוספים כדי לגדל את ה-SFEBs.