בניית מעגלים עצביים בתבנית על מערך מרובה אלקטרודות

קח מערך מרובה אלקטרודות נקי ומעוקר, או MEA, מכשיר המכיל מיקרואלקטרודות כדי להשיג ולהעביר אותות עצביים.

חבר שבלונה פולימרית מעוצבת למיקרומניפולטור והנח אותה על משטח MEA.

תחת מיקרוסקופ, יישר את השבלונה המעוצבת עם האלקטרודות של ה-MEA והצמד אותה ליצירת מודולים.

הסר את המיקרומניפולטור.

העבר את ה-MEA לתא ואקום. הוסף תמיסת מטריצה לשבלונה והחל ואקום כדי להבטיח ציפוי מטריצה אחיד.

הניחו למטריצה להתייבש.

הסר את השבלונה ועקר את ה-MEA על ידי חשיפתו לאור אולטרה סגול.

הוסף תאים עצביים למרכז ה-MEA ואפשר לתאים להיצמד לשכבת המטריצה.

לאחר מכן, הוסיפו אמצעי צמיחה ודגרו.

חומרים מזינים מהמדיה ומהמטריצה החוץ-תאית מאפשרים לתאים לגדול ולהרחיב את ההקרנות, ויוצרים מעגלים עצביים דפוסיים מחוברים זה לזה שניתן להקליט את האותות שלהם באמצעות ה-MEA.

ראשית, נקו את מערך האלקטרודות על ידי שטיפתו מתחת למי ברז, ולאחר מכן סוניקציה בחומר ניקוי אנזימטי מרוכז. חזור על שלבים אלה שלוש פעמים. לאחר מכן, סוניקציה של ה-MEA במים מזוקקים טהורים שלוש פעמים. לאחר מכן, מתחת למכסה המנוע, שטפו את ה-MEA במים מזוקקים לפני עיקורו באור UV למשך 30 דקות.

כעת, צרף שבלונה למיקרומניפולטור מוכן. תחת מיקרוסקופ הפוך, בדוק ויישר את המבנה המעוצב כך שיתאים לאלקטרודות של ה-MEA. לאחר מכן, השתמש במיקרומניפולטור כדי להוריד את השבלונה אל פני השטח של MEA. לאחר החיבור, הרם את המיקרומניפולטור. כעת, העבירו את ה-MEA לתא הוואקום למשך 15 דקות. לאחר מכן, מרחו טיפה של 1 מיליליטר PDL על השבלונה, והחזירו אותה לתא הוואקום למשך 2 מחזורים של 20 דקות.

תן ל-PDL להתייבש למשך הלילה. למחרת, הסר את שבלונות ה-PDMS מה-MEA באמצעות פינצטה. לבסוף, יש לעקר את ה-MEA ב-UV למשך 7 דקות. לאחר מכן הם מוכנים לתאים. בהכנה יש לתרבת תאים ולהכין תרחיפים כמו בפרוטוקול הטקסט. לאחר השעיית מספר התאים הנדרש, צלח אותם במרכז האזור המעוצב על ה-MEA או הכיסוי, ויש להעמיס את MEA בנפחים של 100 מיקרוליטר, וכיסוי יכול להכיל 1,000 מיקרוליטר. דגרו על התאים המצופים למשך 40 דקות. לאחר מכן, מוסיפים מדיום ציפוי.

כדי לשמור על התאים כל 4 ימים, הוסף בחזרה מדיום גידול טרי בתוסף. לאחר היום השישי או השביעי, קשרים עצביים בין המודולים אמורים להתחיל להיווצר.