התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטיים מהונדסים המושרים על ידי בני אדם לנוירונים מוטוריים פונקציונליים

קחו לדוגמה מושבות תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם, או iPSC, שגודלו על צלחת מצופה מטריצה חוץ-תאית.

ה-iPSCs מהונדסים גנטית כדי לבטא גורמי שעתוק הגורמים להתמיינות נוירונים מוטוריים.

הסר את המדיה והוסף אנזימים לניתוק המושבות.

לפרק מכנית את התאים לתרחיף חד-תאי ולאסוף אותם.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.

השעו מחדש את התאים במדיה המכילה מעכב המונע אפופטוזיס תאי.

צלחת את התאים על צלחת מצופה מטריצה.

הוסף אמצעי התמיינות טריים המכילים את האנטיביוטיקה דוקסיציקלין ומעכבי מולקולות קטנות.

דוקסיציקלין גורם לביטוי גורמי שעתוק, בעוד שהמעכבים חוסמים מסלולי איתות ספציפיים, ומקדמים התמיינות iPSC לאבות הנוירונים המוטוריים.

הוסף אנזימים כדי לנתק את התאים.

אסוף את התאים ונתק אותם מכנית.

צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט. להשעות מחדש את התאים במדיה עצבית.

צלח את התאים על מיקרו-שקופיות מצופות חלבון הדבקה כדי לקדם את היצמדות התאים.

גורמי גדילה במדיה גורמים להבשלת אב לנוירונים מוטוריים.

עבור התמיינות נוירונים מוטוריים, נתק את תרביות התאים שעברו טרנספטציה יציבה עם מגיב דיסוציאציה כפי שהודגם כדי לאפשר לאסוף את התאים בצינור של 15 מיליליטר המכיל 5 נפחים של מדיום DMEM/F12. לאחר צנטריפוגה, יש להשעות מחדש את התאים במדיום iPSC אנושי בתוספת מעכב ROCK מיקרומולרי לספירה.

זרע את התאים על כלים מצופים מטריצה בצפיפו