Tissue Immunostaining for Imaging Mass Cytometry
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:33 דק׳ • January 15th, 2026
הנח שקופית זכוכית עם דגימת רקמה קבועה לתוך מאגר אחזור אנטיגן וחמם אותה.
הטמפרטורה הגבוהה וה-pH האלקליין של המאגר שוברים את קישורי החלבון המושרים על ידי קיבוע, וחושפים אפיטופים של אנטיגן.
יש לקרר את השקופית כדי למנוע נזק לרקמות הנגרם מחום, ולאחר מכן לשטוף כדי להסיר עודפי חיץ.
החל מחסום הידרופובי והנח את המגלשה בתא לחות.
הוסף מאגר חוסם חדירה. חומר הניקוי של המאגר מחלחל לממברנות התאים, וחלבונים חוסמים מסווים אתרי קשירה לא ספציפיים כדי להפחית את כתמי הרקע.
הסר עודף חיץ, הוסף קוקטייל נוגדנים מצומד מתכת ודגירה כדי לאפשר קשירת נוגדנים לאנטיגנים ספציפיים.
שטפו את השקופית, הסירו נוגדנים לא קשורים.
הוסף כתם גרעיני מצומד מתכת שנכנס לתאים ונקשר ל-DNA.
שוטפים את הכתם העודף ומייבשים את השקופית.
באמצעות סורק אופטי, השג תמונות ברזולוציה גבוהה של התכונות המבניות של הרקמה, המסייעות בפירוש נתונים מניתוח הדמיה של ציטומטריית מסה של הדגימה המוכתמת.
התחל עם קטע רקמה מטופל מראש של חמישה מיקרומטר המותקן על שקופית תואמת צביעה חיסונית. מקם את השקופיות בדואר שקופיות.
לאחזור אפיטופים המושרה על ידי חום או HIER, הוסף מאגר HIER בדואר השקופיות עד שהרקמה שקועה לחלוטין. הנח את דואר השקופיות בתא הסוואה, והתחל את תוכנית החימום.
לאחר סיום התוכנית, הנח את דואר השקופיות במגש מלא במים קרים, והניח לו להתקרר. שוטפים את השקו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים