הקלטות מהדק טלאי מהדנדריט של נוירון דופמינרגי בפרוסת מוח

התחל עם מערך אלקטרופיזיולוגיה עם פרוסת מוח משותקת שקועה בנוזל מוחי מלאכותי או aCSF המכיל יונים שונים.

ההתקנה כוללת פיפטת תיקון מלאה בתמיסה עשירה באשלגן המחוברת לאלקטרודה הקלטה ומגבר.

הפעל לחץ אוויר חיובי על הפיפטה כדי למנוע את סתימתה. לאחר מכן, מקם אותו ליד דנדריט, השלוחה מקבלת האותות של נוירון דופמינרגי.

גומות הממברנה המתקבלות מאשרות את הקרבה לדנדריט.

שחרר את הלחץ החיובי ליצירת יניקה, ויוצר אטימה הדוקה בין הפיפטה לקרום הדנדריטי.

רשום את תנועת היונים הראשונית כזרם פעולה במתח הבסיס.

זרימה פנימה aCSF עם חוסמי תעלות נתרן וסידן כדי לחסום את התעלות המתאימות, ולמנוע תנועת יונים דרכן.

הפעל מתח שלילי לפתיחת תעלת קטיון מגודרת מתח.

תעלה זו מאפשרת ליוני אשלגן להיכנס לנוירון העצב, מגבירה את זרם הפעולה ומציעה גירוי של הדנדריט בנוירון דופמינרגי

בהליך זה, העבירו פרוסת מוח לתא ההקלטה. עוגן את הפרוסה בתחתית תא ההקלטה עם טבעת פלטינה, וודא שהפרוסה באיכות טובה עם משטח חלק ואחיד. לאחר מכן, בחר נוירון עם דנדריט המשתרע על פני מרחק רב באותו מישור, וודא שניתן לעקוב אחר הדנדריט המעניין לסומה מוגדרת היטב. לאחר מכן, מלאו את פיפטת התיקון בתמיסת אלקטרודה.

כדי לתקן את הדנדריט במצב מחובר לתא, זהה והתמקד בחלק מהדנדריט הפעל לחץ חיובי על הפיפטה, והורד אותה באמצעות המיקרומניפולטור. לאחר מכן, מקם את הפיפטה קרוב לממברנה, והתאם את הלחץ על מנת ליצור גומה קטנה. לאחר מכן, שחרר את הלחץ על קצה הפיפטה ותקן את הדנדריט תוך שליטה בהתנגדות הפיפטה. נסה להשיג התנגדות איטום גדולה מ-1 ג'יגה אוהם, במקרה הטוב בין 3 ל-10 ג'יגה אוהם עבור הקלטות מחוברות לתאים.

לאחר מכן, החזר את הפיפטה הרחק מהקרום בכמה מיקרומטרים כדי למנוע עיוות של הדנדריט. זרמי הפעולה הנראים כאן מייצגים את פוטנציאל הפעולה הספונטני של נוירונים ניגרליים. כדי לדכא את זרמי הפעולה, יש למרוח חוסמי תעלות סידן ונתרן על ACSF. לאחר מכן, החל שלב מתח של 90 מילי-וולט שלילי מפוטנציאל החזקה של 0 מילי-וולט כדי לעורר את זרם הקטיון המופעל על ידי היפר-פולריזציה.