אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:40 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם תרבית נוירונים של גנגליון ספירלי על מערך רב-אלקטרודות, או MEA.
ה-MEA מורכב מאלקטרודות הקלטה המחוברות למגעים באמצעות מעגל.
שטפו את ה-MEA כדי להסיר מדיה ולייבש את המגעים כדי למנוע רעש הנגרם מלחות במהלך ההקלטה.
התקן את ה-MEA על המחזיק שלו והתקן אותו במערך ההקלטה.
מגעי ה-MEA מתיישרים עם מחברי המחזיקים המשדרים אותות חשמליים למערך ההקלטה.
הוסף פתרון מחקה סביבה חוץ-תאית, המאפשר פעילות פיזיולוגית תקינה בתאי העצב.
התחל להקליט. האלקטרודות מזהות אותות ספונטניים או פוטנציאל פעולה הנוצרים על ידי הנוירונים, המוצגים כקוצים בממשק התוכנה.
כעת, החל פולס חשמלי על אלקטרודה אחת המציגה פעילות ספונטנית.
הפולס מייצר שדה חשמלי, המגרה את הנוירונים על האלקטרודות השכנות.
רשום את הפעילות התלויה בגירוי.
לבסוף, הוסף נוירוטוקסין החוסם תעלות יונים מגודרות מתח, ומונע יצירת פוטנציאל פעולה.
הקלט את האות כדי לזהות רעשי רקע.
לאחר 18 יום של תרבית קולקטיבית, יש לשטוף את תרבית MEA בתמיסה החוץ-תאית שהוכנה קודם לכן בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, יבש את המגעים של שבב ה-MEA עם חתיכת רקמה, והרכיב את ה-MEA על מחזיק ה-MEA. לבסוף, התקן את ה-MEA במערך ההקלטה.
לאחר מכן, הוסיפו 300 מיקרוליטר מהתמיסה החוץ-תאית, והמתינו 10 דקות כדי לאפשר למערכת להתייצב לפני ההקלטה. כעת, רשום את הפעילות הספונטנית למשך שתי דקות מכל האלקטרודות, וזהה את האלקטרודות הפעילות. לאחר מכן, זהו את האלקטרודות המגיבות לגירוי.
כדי לא לכלול את חפץ הגירוי, גירוי מאותה אלקטרודה 10 פעמים. אם התרבית מגיבה לפחות שמונה מתוך 10 פעמים, ניתן להניח זאת כתגובה חיובית בעת גירוי המושרה על ידי אלקטרודה. כדי לזהות רעשי רקע, יש למרוח TTX על התרבית בריכוז של מיקרו-מולר אחד כדי לחסום את תעלות הנתרן המגודרות במתח, ולאחר מכן להקליט למשך שתי דקות.