JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 3:37 דק' • July 8th, 2025
התחל עם פרוסת מוח קליפת המוח הקדם-מצחית מאובטחת בנוזל מוחי שדרתי מלאכותי, או aCSF, בתא ההקלטה של מערך אלקטרופיזיולוגיה.
aCSF זה מכיל חוסם תעלות יוני נתרן, המעכב תעלות נתרן בנוירונים.
מקם מיקרופיפטה נשיפה מלאה בחומצה גמא-אמינובוטירית, או GABA, מעל נוירון פוסט-סינפטי.
הנח מיקרופיפטת הקלטה מלאה בתמיסה יונית עם אלקטרודה ליד אותו נוירון .
הפעל יניקה חלשה כדי ליצור אטימה הדוקה עם טלאי קטן של הממברנה העצבית.
לאחר מכן, הפעל יניקה חזקה כדי לשבש את הממברנה המתוקן, ולאפשר גישה לחלק הפנימי של הנוירון.
העבירו את ה-GABA, נוירוטרנסמיטר מעכב, שנקשר לתעלת כלוריד מגודרת ליגנד על נוירונים פוסט-סינפטיים.
זה פותח את התעלה ומאפשר ליוני כלוריד להיכנס לתאי העצב, וליצור זרם פוסט-סינפטי מעכב.
במתח קבוע, רשום את הזרם הפוסט-סינפטי. עלייה בזרם הפוסט-סינפטי המעכב משקפת את תפקידו של GABA בעיכוב פעילות עצבית.
העבירו פרוסת מוח לתא ההקלטה באמצעות פיפטה של פסטר עם קצהו העדין שנחתך כך שיתאים לגודל הפרוסה. לאחר מכן, הניחו עוגן פרוסת פלטינה מעל הפרוסה כדי להחזיק אותה על הרציף. לאחר מכן, מלאו את המיקרופיפטות ההקלטה בתמיסה פנימית, ומלאו את המיקרופיפטות ב-GABA ב-10 מיקרומולר, 50 מיקרומולר ו-100 מיקרו-מולר או aCSF כבקרת רכב.
כדי למנוע סתימה עם פסולת, הפעל לחץ חיובי קל באמצעות מזרק של מיליליטר לפני טבילת אלקטרודת ההקלטה ב-aCSF. תחת מיקרוסקופ, מקם את אלקטרודת ההקלטה ואת המיקרופיפטה כך שהקצות יופיעו במרכז הצג. לאחר מכן, זהו תא עצב מטרה. כוונן את מיקוד המיקרוסקופ תוך הורדה הדרגתית של המיקרופיפטה, והנח אותו מעל נוירון ההקלטה בזווית של 45 מעלות.
שמור על המרחק בין קצה המיקרופיפטה לנוירון המטרה בטווח של 20 עד 40 מיקרומטר. לאט ובזהירות, התקרב לנוירון עם אלקטרודת ההקלטה ואז שחרר את הלחץ החיובי. הפעל יניקה חלשה וקצרה דרך הצינור המחובר למחזיק האלקטרודה כדי ליצור איטום ג'יגה-אום. שמור על המתח באפס מילי-וולט.
לאחר היווצרות אטם הג'יגה-אום, פצה את הקיבול המהיר והאיטי באופן ידני או אוטומטי. לאחר מכן, הפעל יניקה קצרה וחזקה דרך הצינור כדי לפרוץ למצב של כל התא. לאחר מכן, הקלט זרמי IPSC מעוררים במצב מהדק מתח.
ספק נשיפות GABA בודדות או זוגיות דרך המיקרופיפטה הנשלטת על ידי מחולל צעדי שמונה מתח ראשי. שנה את משך הנשיפה כדי להשיג את תוצאות זרמי ה-IPSC המעוררים הטובים ביותר ולמדוד את זרמי ה-IPSC המעוררים.