ניתוח הפעילות העצבית המעוררת טרף בזחל דג זברה מהונדס

התחל עם תא הקלטת התנהגות המכיל זחל דג זברה מורדם וטרנסגני משותק באגרוז נמס נמוך.

אזור הקדם-טקטום של המוח התיכון של הזחל והאונה התחתונה של ההיפותלמוס מכילים נוירונים שהשתנו המבטאים אינדיקטורים של סידן פלואורסצנטי.

הסר את האגרוז סביב ראש הזחל ושטוף במים כדי להסיר שאריות אגרוז.

הניחו פרמציום כטרף ליד הזחל.

העבר את תא ההקלטה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

כאשר הטרף שוחה, עין הזחל מזהה אותו ושולחת אות לאזורי הקדם-טקטום וההיפותלמוס המעורבים בזיהוי טרף.

זה פותח תעלות סידן בתאי העצב האלה, ומאפשר ליוני סידן להיכנס ולהיקשר למדדי הסידן, מה שמוביל לפליטת פלואורסצנטיות.

הקליטו את הדמיית דולג הזמן כדי לזהות את עוצמת הקרינה מתאי עצב לאורך נתיב השחייה של הטרף וצרו מפה צבעונית.

במפה הזו, ראשי חץ מייצגים מסלולי טרף: חיצים שחורים לא מראים עירור עצבי, בעוד שחיצים צבעוניים מצביעים על עירור עצבי מוגבר שמופעל על ידי תנועת הטרף.

לאחר גידול פרמציה והרדמת זחל דג זברה על פי פרוטוקול הטקסט, הניחו את הזחל באגרוז בעל נקודת התכה נמוכה של 2%, והסירו מיד את כל האגרוז העודף כך שפני האגרוז ייראו קמורים מעט. בעזרת מחט ניתוח, כוונו במהירות את הזחל למצב זקוף.

לאחר מכן, בעזרת סכין כירורגית, בצע כמה חתכים קטנים באגרוז כדי להסיר את האגרוז סביב ראש דג הזברה, מה שמפנה מקום לפרמציום לשחות. הסר בזהירות את שאריות האגרוז על ידי שפיכת מי המערכת בעדינות על החדר. לאחר מכן, הכניסו פרמציום אחד לתא ההקלטה כדי לשמש כגירוי חזותי.

לאחר מכן, הנח את תא ההקלטה מתחת למיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי המצויד במצלמת CMOS מדעית ובחר עדשת אובייקט פי 2.5. הפעל את אפליקציית רכישת התמונות עבור המצלמה המצוידת לחץ על חלונית רצף ובחר רשומת דיסק קשיח בחלונית. במקטע הגדרות סריקה, הגדר את ספירת המסגרות ל- 900 או כל מספר מסגרת כולל אחר הרצוי.

בחלונית לכידה, הגדר את זמן החשיפה ל- 30 אלפיות השנייה ואת Binning ל- 2 על 2. לחץ על Live בחלונית הלכידה כדי לאתר את הזחל במצלמה view and focus, ולאחר מכן לחץ על Stop Live ולחץ על כפתור התחל. שמור את הסרט בפורמט .cxd ונתח את הנתונים בהתאם לפרוטוקול הטקסט.