מדידת רמות גלוטמט במוח בהרדמה בחזירונים יילודים באמצעות מערך מיקרואלקטרודות

הצמידו חזרזיר מורדם למסגרת סטריאוטקסית.

בצע חתך בקו האמצע כדי לחשוף את הגולגולת.

הסר חלק מהגולגולת, ואז הסר את הדורה כדי לגשת למוח.

תקן מערך מיקרואלקטרודות, או MEA למסגרת הסטריאוטקסית.

ה-MEA מורכב מפיר קשיח ואתרי רישום, כולל אתרים רגישים לגלוטמט המצופים בגלוטמט אוקסידאז ואתרי זקיף המצופים במטריצת חלבון לא פעילה.

מקם את ה-MEA אנכית מעל אתר הניתוח והנח אלקטרודת ייחוס פסאודו-מתחת לקרקפת לקבלת ייחוס יציב של מתח בסיסי.

הכניסו את ה-MEA לאזור המוח המעניין והתחילו במדידה.

גלוטמט אוקסידאז באתרי ההקלטה ממיר גלוטמט מוח חוץ-תאי למי חמצן, העובר חמצון אלקטרוכימי על פני השטח של האלקטרודה, ויוצר זרם.

אתרי הזקיף מודדים רעשי רקע.

לנרמל את אותות האתר הרגיש לגלוטמט לאותות אתר הזקיף כדי למדוד את רמות הגלוטמט במוח בהרדמה.

כדי להתחיל, צור חתך בקו האמצע של 4 עד 6 סנטימטרים לאורך הגולגולת תוך שימוש בזהירות כדי להימנע מניקוד הגולגולת עם האזמל. לאחר ביצוע החתך, השתמש בנסיגה עדינה ובדיסקציה קהה כדי להרים את הקרקפת מהגולגולת.

לאחר מכן, שפשפו בעדינות את הגולגולת עם כרית גזה כדי להסיר כל רקמת חיבור ולחשוף את קווי התפרים. לאחר מכן, קבע את המיקום המיועד לכריתת הגולגולת. אם אזור העניין נשאר מעורפל, שקף עוד יותר את הקרקפת.

כעת, השתמש במקדחה כירורגית כדי ליצור חלון גולגולת בגודל של כ-0.25 סנטימטרים רבועים המכסה את המבנה המבוקש. היזהר לא לפגוע בדורה או במוח שמתחתיו. לפי הצורך, השתמש בכלים כירורגיים עדינים כדי לכרות את הדורה המכסה את רקמת המוח. השתמש בזהירות רבה כדי להימנע מפגיעה במוח.

ניסוי זה משתמש במערך מיקרו-אלקטרודות מבוסס אנזימים שתואר קודם לכן המצופה מראש בגלוטמט אוקסידאז ומצופה ב-MPD. למערכי המיקרו-אלקטרודות יש פיר קשיח של 40 מילימטר המותאם לשימוש עם חזירונים. אבטח את זרוע המתכת למיקרומניפולטור, ולאחר מכן מקם את מערך המיקרו-אלקטרודות בצורה אנכית ככל האפשר מעל ברגמה.

לאחר מכן, הורד בזהירות את המערך נמוך ככל האפשר מבלי לגעת במשטח הגולגולת, תוך שים לב לקואורדינטות של ברגמה. כעת, השתמשו באטלס מוח של חזרזיר כדי לקבוע את הקואורדינטות הסטריאוטקסיות המדויקות של מבנה העניין. לאחר מכן, מקם מחדש את המיקרואלקטרודה בהתאם.

לאחר מכן, הנח את האלקטרודה הפסאודו-ייחוס מתחת לקרקפת, והבטיח מגע עם החיה. כעת, הורידו לאט לאט את מערך המיקרואלקטרודות לתוך המוח כמעט לעומק המתאים. עבור 2 המילימטרים האחרונים של הנסיעה, השתמש במיקרו-כונן הידראולי כדי להוריד בעדינות את המערך למבנה המעניין עם מינימום טראומה לרקמות.

לאחר מיקום מערך המיקרו-אלקטרודות, המתן 30 דקות כדי לאפשר לאלקטרודות להגיע לקו הבסיס. לאחר מכן, בצע מדידות במשך כשלוש שעות. אם החזרזיר אמור לשרוד את הניסוי, סגור את החתך לאחר איסוף הנתונים.