רישום פעילות עצבית של רקמת היפוקמפוס פרושה באמצעות מערך מיקרואלקטרודות חודרות

קחו תא הקלטה המכיל את מערך המיקרואלקטרודות החודר או PMEA, המתעד אותות חשמליים מרקמה עצבית.

חבר את הכניסה לבקבוקים המכילים aCSF מחומצן ו-aCSF מחומצן עם 4-אמינופירידין או 4-AP באמצעות מחבר תלת-שסתומי.

חבר את השקע לצינור ואקום.

מחממים את הצינור בין הכניסה לתלת-שסתום לטמפרטורה פיזיולוגית.

כשהכניסה והיציאה סגורים, העבירו את ההיפוקמפוס הפרוש לתא.

תחת מיקרוסקופ, מקם את ההיפוקמפוס על ה-PMEA.

הסר את התמיסה מהתא.

הנח עוגן רקמה כדי להחזיק את הרקמה על אלקטרודות PMEA.

פתח את הכניסה והיציאה כדי להתחיל את זרימת ה-aCSF.

דגרו על הרקמה עם aCSF כדי לאפשר התאקלמות עצבית.

לאחר מכן, זרום ב-aCSF עם 4-AP. ה-4-AP חוסם את תעלות האשלגן העצביות, ומאריך את משך פוטנציאל הפעולה.

ה-PMEA לוכד את האותות החשמליים פרופורציונליים לירי העצבי המשופר מנוירונים בהיפוקמפוס.

בהליך זה, מלאו בקבוק אחד ב-aCSF רגיל ובקבוק אחר ב-4-AP aCSF. מבעבעים את התמיסות עם 95% חמצן, 5% פחמן דו חמצני מתחילת הניסויים. השתמש במחבר תלת-שסתומי כדי לשלוט בפתרון שייבחר במהלך ניסוי.

לאחר מכן, חבר צינור ואקום לשקע החדר כדי להסיר את התמיסה למיכל אבק. מחממים את הצינור לפני העברת התמיסה לתא ההקלטה ושומרים אותו בטמפרטורה מבוקרת של 35 מעלות צלזיוס. לאחר סגירת הכניסה והיציאה של תא ההקלטה, השתמש בטפטפת פיפטה מזכוכית בהתאמה אישית כדי להעביר את ההיפוקמפוס שנפרש לתא ההקלטה.

מתחת למיקרוסקופ, מקם את ההיפוקמפוס הפתוח כשהצד הברור שלו פונה כלפי מטה, אזור CA3 מצביע הצידה, ושדה CA1 מצביע לכיוון החוקר. שאפו בזהירות את התמיסה בתא באמצעות פיפטת ואקום מקצה תא ההקלטה עד לייבוש התא והרקמה מונחת על המערך.

לאחר מכן, הניחו בזהירות עוגן רקמה מותאם אישית על גבי הרקמה כדי להחזיק את ההיפוקמפוס הפרוש על המערך. מלאו מחדש את תא ההקלטה בכמה טיפות תמיסה. פתח בהדרגה את הכניסה והיציאה כדי לכוונן את קצב הזרימה לכשתי טיפות לשנייה בתא הטפטוף העירוי.

דגרו את הרקמה בתא ההקלטה עם aCSF רגיל למשך כדקה. לאחר מכן, העבר את אספקת התמיסה ל-aCSF מומס 4-AP, והתאם את קצב הזרימה כראוי. דגרו את הרקמה ב-aCSF מומס 4-AP למשך כ-5 עד 10 דקות לפני ההקלטה.