גרימת דליות אקסונליות עם גירוי מיקרומכני על נוירונים

התחל באבטחת מיקרופיפטה עם צינורות מחוברים למיקרומניפולטור.

חבר את הקצה השני של הצינור למזרק מלא במאגר מלח באמצעות מחבר עם שסתום מסתובב.

הגדר את המזרק בגובה המספק לחץ מספיק כדי לגרום לדליות באקסונים.

דליות אקסונליות הן נפיחויות דמויות חרוזים המתרחשות לאורכו של אקסון.

מקם את המיקרופיפטה בזווית הרצויה ביחס לצלחת התרבות.

השתמש באור פלורסנט מהמיקרוסקופ כדי ליישר את קצה המיקרופיפטה ולהוריד אותו ליד פני השטח של צלחת תרבית התאים המכילה מאגר מלח.

כעת, הפעל את האור המועבר וכבה את מסנן הפלורסנט.

הניחו כיסוי עם נוירונים על הצלחת.

ראשית, התמקדו במיקרופיפטה והתאימו את מיקומה.

לאחר מכן, התמקדו באזור שמכיל את נוירוני המטרה.

פתח את השסתום כדי להפעיל לחץ נוזלים. גירוי מיקרומכני זה גורם לדליות בתאי עצב אלה.

בהליך זה, הכנס את הפיפטה לחלק העליון של הבורג של המיקרומניפולטור כדי להחזיק אותה במקומה. זווית את הפיפטה בזווית של 45 מעלות עם פני השטח לצלחת תרבית התאים. הפעל את מסנן הקרינה. פתח את הצמצם וודא שניתן לראות נקודה פלואורסצנטית נכנסת דרך המטרה.

בעזרת המיקרומניפולטור, הזיזו את הפיפטה למצב שמיישר את הקצה עם הנקודה הפלואורסצנטית, והורידו את הפיפטה למצב ממש מעל גובה צלחת תרבית התאים. ברגע שהוא במקומו, הפעל את האור המועבר וכבה את הקרינה. בעזרת פינצטה, העבירו כיסוי אחד כשהתאים פונים לכיוון הפיפטה מלוח תרבית התאים לצלחת תרבית התאים המכילה 2 מיליליטר של מאגר האנק בטמפרטורת החדר.

באמצעות כפתור המיקוד העדין והמטרה פי 20, התמקד במישור כארבע סיבובים מלאים מעל התאים. לאחר מכן, השתמש במיקרומניפולטור כדי למקם את קצה הפיפטה כך שיהיה ממוקד ובמרכז הצד השמאלי של המטוס, כפי שניתן לראות דרך העיניות. ברגע שהפיפטה נמצאת במקומה, מקדו את המיקרוסקופ במישור המכיל את אזור העניין.

בהדמיה של 7DIV, נוירונים בהיפוקמפוס של עכברים שעברו טרנספטציה של GFP הראו אקסון לפני ואחרי נשיפה.