גישה לא פולשנית לחקר האלקטרופיזיולוגיה של נוירונים מוטוריים בעוברים של דגי זברה

הניחו עוברי דג זברה מהונדסים גנטית תחת סטריאומיקרוסקופ והתבוננו בפיתול הזנב הספונטני המופעל על ידי נוירונים מוטוריים של חוט השדרה.

התכונות המהותיות של נוירונים אלה גורמות לזרם יונים דרך תעלות נתרן, מה שמוביל לדפולריזציה ספונטנית של הממברנה וליצירת פוטנציאל פעולה המתפשט לשרירים, ומפעיל את סלילת הזנב. מדוד את תדירות הסליל.

העבירו כמה עוברים לחוסם תעלות נתרן כדי לעכב את שטף הנתרן ולהעריך את תדירות הפיתול המופחתת.

הרכיבו עוברים לא מטופלים באגרוז מותך; הניחו לאגרוז להתמצק כדי להגביל את התנועה, והתבוננו במיקרוסקופ פלואורסצנטי.

הנוירונים המוטוריים מבטאים חיישן ביולוגי עם תחום חישת מתח הקשור לממברנה, או VSD, המאוחה לפלואורופורים תורמים ומקבלים.

דה-פולריזציה משנה את קונפורמציית ה-VSD, ומקרבת את הפלואורופורים.

עם העירור, התורם מעביר אנרגיה למקבל, וגורם לפליטת פלואורסצנטיות של המקבל.

הוסף את החוסם כדי לעכב דפולריזציה, מה שמפחית את פליטת המקבל, ומאשר עיכוב בתיווך חוסם של דה-פולריזציה ספונטנית בנוירונים.

לניתוח ספונטני של פיתול הזנב, העבירו את העוברים לצלחת פטרי עגולה בגודל 90 מילימטר מלאה במי דגים המכילים 0.2% DMSO, וביצעו אותם ידנית באמצעות שני מלקחיים של תכשיטן עם קצות או מחטים חדים. לאחר מכן, דגרו על העוברים למשך 5 דקות בחום של 28 מעלות צלזיוס. באמצעות מצלמה דיגיטלית המותקנת על סטריאומיקרוס