רישום אלקטרופיזיולוגי של תגובות מתח של פוטורצפטורים ברשתית דרוזופילה לגירויי אור

הרכיבו זבוב דרוזופילה על מחזיק כשראשו חשוף.

צרו פתח בעין אחת והסירו את הקרנית כדי לחשוף את הרשתית.

הנח את המחזיק על פלטפורמת ההקלטה.

הכנס אלקטרודת ייחוס קהה המכילה תמיסת מלח פיזיולוגית לתוך קפסולת הראש.

לאחר מכן, הכנס אלקטרודת הקלטה חדה המכילה תמיסה תוך-תאית המחקה סביבה דרך הפתח לרשתית.

אפשר לעין להסתגל לחושך.

מדוד את ההתנגדות של אלקטרודת ההקלטה כדי להבטיח את התאמתה להקלטה.

לאחר מכן, בטל את הפרש המתח הבסיסי בין אלקטרודות ההקלטה והייחוס.

במהלך הסתגלות לחושך, תעלות יונים ספציפיות בתאי קולטני האור ברשתית נשארות פתוחות, ומאפשרות זרם יונים חיובי קבוע.

לעורר את העין עם הבזקי אור.

בתגובה, תעלות היונים נסגרות, מפחיתות את זרם היונים החיובי ומעודדות שטף.

כתוצאה מכך, פוטנציאל הממברנה של קולטני האור הופך שלילי יותר, ונמדד על ידי אלקטרודת ההקלטה כירידה במתח.

בעת הפעלת המיקרואלקטרודה ampחיים יותר, תמיד להיות מקורקע על ידי נגיעה במשטח המתכת של כלוב פאראדיי או שולחן נגד רעידות כדי למנוע מטענים סטטיים. אבטח את הזבוב המותקן לעמוד פלטפורמת הכנת הזבובים.

סובב את מחזיק הזבוב כך שעינו השמאלית של הזבוב פונה ישירות לחוקר. לאחר מכן, השתמש במיקרומניפולטור קטן וגס כדי להכניס את אלקטרודת הייחוס הקהה בעדינות דרך האוקלי של הזבוב לתוך קפסולת הראש. ודא שהזבוב עדיין נראה בריא ומזיז את האנטנות שלו. ההכנה חייבת להיות מעולה כדי להצדיק הקלטה ממנה.

כעת, הכניסו את המיקרו-אלקטרודת ההקלטה החדה לעין שמאל דרך הפתח המצופה ג'לי. כשהוא נכנס לרקמה, מיקום קצה האלקטרודה צריך להיות ברור על ידי דפוס ההשתקפות שלו. קצה האלקטרודה השברירי חייב להיות מונחה בצורה מושלמת אחרת הוא יישבר, וזה מאתגר מאוד.

בהתאם לסוג התא שממנו נרשם, ראש הזבוב צריך להיות מכוון מעט אחרת. כשהאלקטרודות במקומן, הפעל את מגבר המיקרואלקטרודה. לאחר מכן כבה את מקור האור הקר, נתק אותו מהחשמל וחבר אותו לקרקע המרכזית כדי למזער רעש חשמלי המושרה על ידי לולאת הארקה.

לאחר מכן, כוונן את מכווני האור של צוואר האווז כך שניתן יהיה להזיז את מערכת זרוע הקרדן בחופשיות סביב הזבוב. לאחר מכן, כבו את אורות החדר כדי להכניס את הכנת הזבוב לחושך יחסי. כעת, מדוד את ההתנגדות של אלקטרודת ההקלטה בעין. זה חייב להיות בין 100 ל -250 מגה-אוהם.

לאחר מכן, הגדר את המגבר למהדק או גשר זרם, ואפס את המתח בין האלקטרודות. לאחר שהזבוב הותאם לחושך למשך מספר דקות, הכניסו את קצה אלקטרודת ההקלטה לתוך העין בצעדים של 0.1 עד 1 מיקרון באמצעות צעד פייזו או באמצעות סיבוב עדין של כפתור הרזולוציה העדינה.

בכל שלב, גרו את העין עם הבזק אור של 1 עד 10 אלפיות השנייה. כל הבזק אור יגרום לירידה קצרה בכרךtage או ב-ERG.