JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 4:06 דק' • July 8th, 2025
התחל עם זחל דג זברה משותק ומשותק בתא הקלטה מלא בתמיסה חוץ-תאית במערך אלקטרופיזיולוגיה.
מלאו מיקרופיפטה מגיעה בתמיסה החוץ-תאית המכילה יונים המספקים מוליכות חשמלית לרישום פעילות עצבית.
הרכיבו אותו למיקרומניפולטור המכיל אלקטרודת הקלטה המחוברת למגבר להקלטת אותות.
הפעל לחץ אוויר חיובי כדי למנוע את סתימת הפיפטה.
הזיזו את קצה הפיפטה לאורך עצב הקו הרוחבי ומקמו אותו בסמוך לגנגליון הנכנס המכיל מקבץ של גופי תאים עצביים נכנסים.
התהליכים התאיים של תאי העצב האלה מחוברים לתאי השיער שנמצאים לאורך הקו הרוחבי, שחשים תנועות מים.
לאחר מכן הפעל לחץ שלילי עדין ליצירת אטימה רופפת בין המיקרופיפטה לגנגליון האפרנטי.
רשום את האותות החשמליים מהנוירונים הנכנסים, המקבלים את הקלט החושי מתאי השיער בזחל המשותק.
קבעו את זחלי דג הזברה והעבירו אותם לצלחת פטרי בגודל 35 מילימטר באמצעות פיפטת העברה בעלת קצה גדול. הסר כמה שיותר מהתמיסה שמסביב. טבלו זחלים ב -10 מיקרוליטר של 0.1% אלפא בונגרוטוקסין למשך כחמש דקות. שוטפים את הזחל המשותק בתמיסה חוץ-תאית למשך 10 דקות. לאחר מכן, השתמשו בפיפטה כדי להעביר את הזחל מאמבט התמיסה החוץ-תאית לצלחת ההקלטה עם תחתית הסיליקון.
תחת סטריאומיקרוסקופ, מקם בעדינות את הזחלים עם מלקחיים עדינים מעל מרכז שטיח הסיליקון, הצד הצדדי כלפי מעלה כשהקצוות הקדמיים והאחוריים של הגוף עוברים משמאל לימין. בעזרת מלקחיים בעלי קצה עדין, הכנס את הסיכה החרוטה בצורה אורתוגונלית לסיליקון דרך החריץ הגבי של הזחלים, ישירות גב לפי הטבעת. הכנס את הסיכה השנייה דרך הנוטוכורד ליד קצה הזנב, והכנס את הסיכה השלישית דרך הגב הנוטוכורד של שלפוחית הגז. הכנס את הסיכה הרביעית דרך השלפוחית האוטית תוך מתן סיבוב קל כאשר הסיכה נכנסת לתוך המעטפת.
כאשר מופעל סיבוב קל, שימו לב לרקמה שבין הקליתרום לשלפוחית האוטית כדי לחשוף את אשכול הסומטה הנכנסת. הנח את הלבה המוצמדת מתחת למטרה פי 10 על שלב קבוע של מיקרוסקופ ה-DIC, וכוון את החריצים המיוספטים של גושי השרירים במקביל לווקטור שלב הראש השמאלי.
הנח את חוט ההארקה לתוך תמיסת האמבטיה, וודא שהוא מחובר לראש השמאליtagה. מלאו את אלקטרודת ההקלטה הנכנסת ב-30 מיקרוליטר של תמיסה חוץ-תאית, והכנסו אותה לתוך מחזיק הפיפטה הימני של שלב הראש. לאחר מכן, הורד אותו לתמיסת הכלים תוך הפעלת לחץ חיובי המיוצר על ידי מתמר פנאומטי.
אתר את האלקטרודה והביא את קצה האלקטרודה מעל הדגימה. בעזרת מיקרומניפולטור, הורד את קצה האלקטרודה הנכנס עד שהוא מחזיק את מקומו מעל הקליתרום. הגדל את ההגדלה פי 40 טבילה ואתר את הצומת של עצב הקו הצדדי האחורי והקליתרום. הביאו את קצה האלקטרודה מעל הגנגליון הנכנס, והורידו את הפיפטה עד שהקצה יוצר קשר עם האפיתל. בעדינות, תמרן את האלקטרודה כך שכל היקף הקצה ייצור קשר עם הגנגליון הנכנס.