רישום טלאי מהדק מחורר של נוירונים חושי ריח בעכברים

קחו לדוגמה את ראשו הכרות של עכבר מהונדס גנטית. אפיתל הריח באפו מכיל נוירונים חושי ריח, או OSNs, עם קולטני ריח מתויגים פלואורופור.

הסר את העור ונתח את הראש כדי לבודד את המחיצה עם אפיתל ריח מחובר.

הפרד ואבטח את האפיתל בתא הקלטה.

באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, זהה את הקולטנים המסומנים כדי למקד את הכפתור הדנדריטי של ה-OSNs.

הביאו פיפטה הקלטה עם תמיסה תוך-תאית המכילה ניסטטין, אנטיביוטיקה מחוררת ממברנה.

הפעל לחץ חיובי כדי למנוע סתימת פיפטה. הכנס את הפיפטה לאפיתל והתקרב ל-OSN.

עבור ללחץ שלילי ויוצר חותם עם קרום התא. הפעל זרם כדי לשמור על הממברנה בפוטנציאל המנוחה.

ניסטטין מחורר את הממברנה, ומאפשר מדידה של זרמים יוניים תוך תאיים.

מקם פיפטה המכילה ממריץ ריח ליד ה-OSN. שחרר את החומר הממריץ, שנקשר לקולטני הריח, ומפעיל את פתיחת תעלת היונים כדי לאפשר זרימת יונים. רשום את האותות האלקטרופיזיולוגיים המתקבלים.

עבור פרוטוקול זה, יש עכברים זמינים בין גיל 2 ל-4 שבועות. במצגת זו משתמשים בעכברים המבטאים OR/IRES/tauGFP.

על ידי שימוש בעכברי OR/IRES/tauGFP, כל תאי העצב המבטאים את ה-OR המעניין יסומנו ב-GFP. ניתן להשתמש בשיטה זו עבור OR המתבטא בכל האזורים. עם זאת, ניתוחים והקלטות יהיו קלים יותר עבור ניתוח המתבטא באזור הגב.

התחל בהרדמה ולאחר מכן עריפת ראשו של עכבר.

התוצאה של פרוטוקול זה תלויה באיכות הדיסקציה.