ניטור אופטי ואלקטרופיזיולוגי סימולטני של תאי עצב בפרוסות מוח

התחל בהחדרת נוזל מוחי מלאכותי מאוורר או aCSF על רשת רשת בתא זלוף.

העבירו פרוסת מוח המכילה נוירונים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ועגנו אותה במכשיר חוטי פלטינה.

סובבו את רשת השינוי ליישור.

הורד את הגשושית הרב-ערוצית לכיוון הפרוסה.

התאם את קוביית המסנן להדמיית חלבון פלואורסצנטי.

סובב את הפרוסה כדי ליישר את הבדיקה.

התאם את גובה הגשושית מתחת לפני הרקמה.

כעת, השתמשו ב-aCSF והתמקדו בתאי העצב המסומנים בפלואורסצנט.

באמצעות מטרה בעלת עוצמה גבוהה, התמקד ברקמה והתאם את אור העירור.

השתמש במסנן אור מתאים כדי לצפות בפלואורסצנטיות בנוירונים.

כוונן את עדשת המטרה כדי ליצור מקום לפיפטת התיקון ולהפעיל לחץ חיובי.

לאחר מכן, מקם את הפיפטה ליד תא העצב כדי ליצור גומת ממברנה.

לבסוף, הפעל יניקה חלשה כדי ליצור אטימת ממברנה, ואחריה יניקה חזקה כדי לשבור את הממברנה ולקבל הקלטות חשמליות מהנוירון הממוקד.

כדי למקם את הגשושית הרב-ערוצית בשקופית רקמת המוח ex vivo, החדרת ACSF ניסיוני מבעבע במהירות של שלושה עד שישה מיליליטר לדקה, והעבירו את פרוסת המוח המכילה את אזור העניין לרשת הרשת בתא הזלוף של המיקרוסקופ. עוגן את פרוסת המוח עם נבל פלטינה. סובב את רשת הרשת כך שקו מגעי האלקטרודה בקצה הדיסטלי של הגשושית הרב-ערוצית יהיה בערך בניצב למשטח ה-PL.

תחת תאורת שדה רחב ובקרה עדינה של המיקרומניפולטור, הורד את הגשושית הרב-ערוצית לכיוו