קביעת השפעת הורמון גדילה לבדיקה על נוירונים של קיספפטין באמצעות מהדק תיקון של תא שלם

אבטח פרוסת היפותלמוס של עכבר טרנסגני בתא הקלטה עם aCSF.

הפרוסה מכילה נוירונים פלואורסצנטיים המבטאים חלבון קיספפטין, החיוניים לוויסות מערכת הרבייה.

הרכיבו מיקרופיפטה הכוללת אלקטרודת הקלטה בתמיסה פנימית.

אתר מיקרוסקופית נוירון קיספפטין פלואורסצנטי.

הפעל לחץ חיובי על הפיפטה וקדם אותה לעבר נוירון המטרה. במגע, הלחץ יוצר כניסה על הממברנה העצבית.

הפעל לחץ שלילי קצר ויוצר איטום בעל עמידות גבוהה בין המיקרופיפטה לקרום.

הגדר את מתח ההחזקה בפוטנציאל המנוחה הפיזיולוגי של הנוירון למדידות מדויקות.

החל פעימות לחץ שליליות קצרות כדי לשבור את הממברנה, וליצור תצורת תא שלם.

אשר את כדאיות הנוירון על ידי ניטור הפרמטרים.

הכנס הורמון גדילה לבדיקה, המפעיל מסלולי איתות וגורם לשינויים בפוטנציאל הממברנה של הנוירון.

מדוד את השינויים בפוטנציאל הממברנה כדי לקבוע את ההשפעה המעכבת של הורמון הגדילה על הפעילות העצבית.

העבירו פיסת מוח מעניינת, אחת בכל פעם, לתא ההקלטה באמצעות פיפטת העברה אקרילית. החזק את הפרוסה עם עוגן פרוסה כך שהיא לא תזוז במהלך הזלוף של aCSF. מקם את הפרוסה למרכז תא ההקלטה באמצעות עדשת האובייקט בעלת ההספק הנמוך של מיקרוסקופ הטבילה פי 10 או 20x.

מיקום הפרוסה הוא קריטי כדי לאפשר תצוגה טובה של האזור הרצוי מתחת למיקרוסקופ ולהגעה מושלמת למיקרופיפטה ההקלטה. לאחר איתור אזור העניין, העבר את עדשת האובייקט לעדש