הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של תאי עצב מתוכנתים מחדש בפרוסת מוח של עכבר

קחו פרוסת עטרה של עכבר מהונדס גנטית בתא הקלטה מלא בופר מחומצן.

הפרוסה מכילה את האזור הסטריאטלי, שיש בו אינטרנוירונים שתוכנתו מחדש מתאי מבשר אוליגודנדרוציטים המסומנים על ידי סמן בין-עצבי וביטוי חלבון פלואורסצנטי.

הרכיבו פיפטת הקלטה המורכבת מאלקטרודה השקועה בתמיסה תוך-תאית.

זיהוי מיקרוסקופי של אינטרנוירון פלואורסצנטי.

שמור על לחץ חיובי בפיפטה וקדם אותו לעבר תא העצב הפנימי של המטרה, תוך יצירת קשר עם הממברנה.

הפעל לחץ שלילי ליצירת איטום בעל עמידות גבוהה.

הפעל פעימות לחץ שליליות כדי לשבור את הממברנה, וליצור תצורת תא שלם.

שמור על פוטנציאל הממברנה של האינטרנוירון בערך שלילי קבוע.

הפעל זרמים מצטברים קצרים, פתח את תעלות היונים ושנה את פוטנציאל הממברנה, תוך הפעלת פוטנציאל פעולה.

בסופו של דבר, הממברנה חוזרת לפוטנציאל המנוחה.

שימו לב לשינויים אלה בפוטנציאל הממברנה בתגובה להזרקה הנוכחית, מה שמעיד על התבגרות עצבית ותכנות מחדש מוצלח.

לאחר העברת קטע רקמה אחד לתא הקלטה לאלקטרופיזיולוגיה, הרכיבו את פיפטת הזכוכית על אלקטרודת ההקלטה, והורידו אותה לתמיסה. בדוק שוב את ההתנגדות של האלקטרודה. לאחר מכן, התקרב לאט לתא המתוכנת מחדש עם הפיפטה, תוך שמירה על לחץ חיובי קל באלקטרודה כדי להימנע מסתימת הקצה, ובדוק שהתא חיובי ל-GFP לפני התיקון.

כאשר התא מתוקן, שמור על התא בזרם מהדק ממינוס 60 עד מינוס 70 מילי-וולט, ו