רישום מהדק טלאי של תא שלם בנוירון ג'לטינוזה מהותי של פרוסת חוט השדרה

הנח פרוסת חוט שדרה של חולדה בתא הקלטה ואבטח אותה עם עוגן רקמות.

חלחלו את הפרוסה בנוזל מוחי מלאכותי.

תחת מיקרוסקופ, זהה את אזור החומר הג'לטינוזה השקוף או אזור SG ובחר נוירון SG בריא.

מקם פיפטת טלאי מלאה בתמיסה יונית ליד הנוירון.

הפעל לחץ חיובי עדין כדי להסיר כל פסולת מקצה הפיפטה.

הזיזו את הפיפטה לכיוון הנוירון.

לאחר מכן, שחררו את הלחץ החיובי ליצירת גומה על הממברנה העצבית, וצרו אטימה.

שנה את פוטנציאל ההחזקה כדי לקרב אותו לפוטנציאל הממברנה במנוחה, או RMP.

השתמש ביניקה קצרה כדי לקרוע את הממברנה, וליצור תצורה של תא שלם.

ב-RMP, החל פולסים חשמליים דה-פולריזציה.

פולסים אלה פותחים תעלות נתרן מגודרות מתח, ומאפשרות זרימה מהירה של יוני נתרן.

זרם יונים זה מפעיל פוטנציאל פעולה, וכתוצאה מכך ירי נוירונים.

רשום את דפוסי הירי של תאי העצב.

כדי לבצע הקלטות מהדק טלאי של תאים שלמים מנוירונים של חומר ג'לטינוזה או SG, השתמש בתמיסות תוך-תאיות מבוססות יון אשלגן להקלטה, תוך יישום תמיסה מבוססת קטיון צזיום רק לרישום זרמים פוסט-סינפטיים מעכבים.

העבר בעדינות את פרוסת חוט השדרה לתא ההקלטה, ולאחר מכן, ייצב אותה היטב עם חוט פלטינה בצורת U עם חוטי ניילון, ליציבות פרוסה אופטימלית. יש להחדיר את הפרוסה בהתמדה עם ACSF מבעבע בטמפרטורת החדר, ולהגדיר את קצב הזלוף בין 2 ל-4 מיליליטר לדקה כדי להשיג חמצון מספיק.

לאחר מכן, באמצעות עדשת מיקרוסקופ ברזולוציה נמוכה, זהה את האזור של נוירוני SG כרצועה שקופה. בחר נוירון בריא, המאופיין בצורה תלת מימדית עם קרום בהיר וחלק, כתא המטרה, באמצעות המטרה ברזולוציה גבוהה, והתאם אותו למרכז מסך צג הווידאו.

מלאו מיקרופיפטה בנפח מתאים של תמיסה תוך-תאית על בסיס אשלגן או על בסיס צזיום-יון. לאחר מכן, הכנס את המיקרו-פיפטה למחזיק האלקטרודה, וודא שהתמיסה התוך-תאית יוצרת קשר עם חוט הכסף שבתוך המחזיק. הביאו את המיקרו-פיפטה למיקוד, והשתמשו במיקרומניפולטור כדי לטבול אותה ב-ACSF. הפעל לחץ חיובי עדין כדי לסלק כל לכלוך ופסולת.

הזיזו בהדרגה את המיקרופיפטה לעבר תא העצב הממוקד. ברגע שהפיפטה מתקרבת לתא העצב, ונוצרת גומה קטנה מאוד על הממברנה העצבית, שחררו את הלחץ החיובי ליצירת ג'יגה-סיל. שנה את פוטנציאל ההחזקה למינוס 70 מילי-וולט, שהוא קרוב לפוטנציאל הממברנה הפיזיולוגית של התא.

לאחר מכן, הפעל יניקה חולפת ועדינה על המיקרופיפטה כדי לקרוע את הממברנה וליצור תצורה טובה של תא שלם. רשום מאפייני ירי על ידי בדיקת דפוס הירי של כל נוירון במהדק זרם עם סדרה של פולסי זרם דה-פולריזציה של שנייה אחת של 25 עד 150 פיקואמפים עם מרווחים של 25 פיקואמפ בפוטנציאל הממברנה במנוחה.