רישום פוטנציאל שדה מקומי בפרוסות קליפת המוח של ההיפוקמפוס-אנטורינלי של עכבר

אבטח פרוסת קליפת המוח ההיפוקמפוסית-אנטורינלית של העכבר בתא הקלטה שקוע.

זרימה רציפה של ACSF מחומצן בטמפרטורה קבועה כדי לשמור על כדאיות הרקמות.

מקם פיפטת גירוי מלאה בתמיסת אלקטרוליט בתוך השכבה הרדיומטית של אזור CA3 בהיפוקמפוס, המכילה נוירונים המקבלים מידע מקליפת המוח האנטורינלית.

הכנס פיפטת הקלטה מלאה ב-ACSF לשכבה הפירמידלית של אזור CA1, המורכבת מנוירונים היוצרים סינפסות עם הקרנות אקסונליות מה-CA3.

באמצעות פיפטת הגירוי, הפעל פולס חשמלי כדי להפעיל פוטנציאל פעולה בנוירונים CA3 הפרה-סינפטיים.

פוטנציאל הפעולה גורם לשחרור נוירוטרנסמיטורים, הנקשרים לקולטנים על נוירוני CA1 הפוסט-סינפטיים. הקישור גורם לזרם יונים, מה שמוביל לשינוי בפוטנציאל הממברנה.

השינויים המשולבים בפוטנציאל הממברנה של נוירונים פוסט-סינפטיים מרובים של CA1, המכונים פוטנציאל השדה המקומי או LFP, נרשמים מחוץ לתאית על ידי פיפטת ההקלטה.

כדי לתעד את פוטנציאל השדה המקומי, מלאו של 400 מיליליטר ב-ACSF בועות קרבוגן, והנח קצה אחד של צינור המשאבה לתוך הכוס. הפעל משאבה פריסטלטית במהירות של שמונה עד 10 מיליליטר לדקה, כדי לכוון ACSF מכוס ה-400 מיליליטר למאגר מחומם ומהמאגר לתא ההקלטה ב-32 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, מהדק לזמן קצר את הצינור, וכבה את המשאבה כדי להשהות את הזרימה. בעזרת מלקחיים עדינים, העבירו פרוסת רקמת מוח לתא ההקלטה בפינת נייר העדשה שעליו מונחת הרקמה, חתכו למטה. קלף את נייר העדשה, השאר את הפרוסה שקועה בתא ההקלטה, והשתמש בנבל כדי לאבטח את הפרוסה.

בעזרת מיקרומניפולטור ידני, קדם לאט את קצה פיפטת הגירוי המלאה בנתרן כלורי לתוך פני הפרוסה בזווית של 30 עד 45 מעלות. לאחר מכן, השתמש במיקרומניפולטור שני כדי לקדם לאט את קצה פיפטת השדה המקומי המלא ב-ACSF לאזור העניין בזווית של 30 עד 45 מעלות, ורשום את פוטנציאל השדה המקומי של הדגימה על פי פרוטוקולים סטנדרטיים.