התנהגות ניווט של זחלי דרוזופילה בתגובה לגירוי אופטוגנטי של נוירוני חוש הריח

קח שליטה וזחלים טרנסגניים של זבוב הפירות דרוזופילה.

הזחלים הטרנסגניים מבטאים תעלת יונים רגישה לאור בתאי העצב של קולטני הריח או ORNs. נוירונים אלה הם חלק ממעגל הריח, המזהה גירויי ריח ומעביר אותות למוח, ומנחה את תנועת הזחל בתגובה לגירויים.

מניחים את הזחלים על צלחת עם אגרוז מוצק בתוך זירת התנהגות, ומכסים את המנה.

חשוף את הזחלים לאורך גל של אור המגרה את תעלות היונים ותעד את התנהגות הניווט של הזחלים.

האור מפעיל את כל הרשתית, כרומופור, הגורם לפתיחת תעלות יונים, המכונה גירוי אופטוגנטי, ומאפשר זרם קטיונים.

הזרם מייצר פוטנציאל פעולה המעביר אותות לאורך מעגל הריח, ומשפיעים על התנהגות ניווט הזחלים.

זחלים טרנסגניים עם תעלות יונים רגישות לאור מציגים שינוי במרחק הנסיעה בקו ישר לפני שינוי כיוון, המכונה אורך ריצה, בהשוואה לזחלי הביקורת.

לבדיקת ההתנהגות, שמור על טמפרטורה ולחות עקביים בחדר ההתנהגות. הכן מדיום זחילת זחלים על ידי יציקת 150 מיליליטר של 1.5% אגרוז מומס לתוך צלחת פטרי מרובעת בגודל 22 ס"מ על 22 סנטימטר.

הניחו לאגרוז להתמצק ולהתקרר במשך שעה עד שעתיים בצלחות הפטרי, לפני השימוש בהם במבחן ההתנהגות. לאחר שהאגרוז התמצק, העבירו לא יותר מ-20 מזחלי הכוכב השלישי המוכנים למרכז צלחת הפטרי וכסו את צלחת הפטרי במכסה.

הנח את צלחת הפטרי בזירת ההתנהגות מתחת למצלמת ה-CCD. הפעל את מקור אור ה-LED האינפרא אדום בגודל 850 ננומטר כדי לדמיין זחלים בסרטון. הפעל את מצלמת ה-CCD כדי להקליט את תנועת הזחלים. לבסוף, עברו לעיבוד וניתוח נתונים.