עיכוב בתיווך מיקרו-רנ"א של זרמים פוסט-סינפטיים מעוררים בפרוסות היפוקמפוס עכבר

קחו למשל פרוסות מוח של עכבר בהיפוקמפוס המכילות נוירונים CA3 הנגועים בווקטור ויראלי רקומביננטי.

הגנום הנגיפי מבטא ערוץ המופעל על ידי אור המתויג עם מדווח פלואורסצנטי ומיקרו-RNA המווסת את הביטוי של תעלות סידן מגודרות מתח.

הניחו פרוסה בתא הקלטה בתנאים חשוכים. באמצעות מיקרוסקופ, זהה את נוירוני CA3 הפלואורסצנטיים.

הדבק אלקטרודת הקלטה על נוירון CA1 שמקבל קלט מנוירונים CA3 נגועים. קרע את הממברנה כדי להקליט זרמים יוניים תוך תאיים.

החל מעכב כדי לחסום קולטנים מעכבים של נוירוטרנסמיטורים, ומאפשר רק אותות מעוררים.

באמצעות פולסי אור, מגרים את הערוצים המופעלים באור בתאי העצב CA3 הנגועים, ויוצרים פוטנציאל פעולה.

בעכברים לא נגועים, פוטנציאל הפעולה מפעיל תעלות סידן מגודרות מתח, וגורם לזרם יוני סידן המעורר שחרור נוירוטרנסמיטרים. המוליכים העצביים מפעילים זרמים פוסט-סינפטיים מעוררים, או EPSCs, בתאי העצב CA1.

בעכברים נגועים, ההפחתה בתיווך microRNA של תעלות סידן מגודרות מתח מביאה לעיכוב EPSC.

עבור פרוטוקול זה, השתמש בבעל חיים ש-15 יום לפני או יותר, הוזרק rAAV1/2 למוח, על פי פרוטוקול שפורסם בעבר על ידי Cetin and Company. בודדו את המוח וצרו פרוסות מוח חריפות עם ויברטומה וגז aCSF קר כקרח.

אסוף את הפרוסות של אזור העניין, ומזער את החשיפה שלהן לאור כדי למנוע הפעלת הבדיקה האופטוגנטית. תנו לפרוסות להתאושש במשך 30