מדידת פעילות עצבית בפרוסת מוח של עכבר לאחר דגירה ממושכת

אבטח פרוסת מוח של עכבר בתא הקלטה, עם aCSF מחומצן לאחר דגירה ממושכת.

התאים בפרוסה עמוסים במחוון סידן, המאפשר מדידות סידן תוך תאיות.

קח פיפטה הקלטה הכוללת אלקטרודה בתמיסת אלקטרוליט.

זיהוי נוירון מטרה. מקם את פיפטת ההקלטה בלחץ חיובי על קרום התא, ויוצר גומה.

הפעל לחץ שלילי ליצירת אטימה הדוקה.

יתר על כן, הפעל פעימות לחץ שליליות, קרע את הממברנה וקבע תצורת תא שלם.

להחדיר aCSF עם ריכוז אשלגן גבוה, אשר מבצע דה-פולריזציה של קרום הנוירון.

דפולריזציה פותחת תעלות נתרן, ומפעילה פוטנציאל פעולה, אשר בתורו מפעיל תעלות סידן מגודרות מתח ומאפשר זרימת סידן.

יוני סידן נקשרים למחוון, ומשפרים את הקרינה, אותה ניתן לדמיין בתאורה מתאימה.

העלייה בקרינה התוך-תאית, הנגרמת על ידי זרם סידן לאחר יישום אשלגן, מעידה על כדאיות עצבית לאחר דגירה ממושכת.

להקלטה, הניחו רקמה בתא הקלטה שקוע מתחת למיקרוסקופ, וחדרו אותה עם aCSF מחומצן בקצב זרימה של 4 עד 5 מיליליטר לדקה. החזק את הרקמה באמצעות נבל בהתאמה אישית. לאחר מכן, הכינו כמה פיפטות הקלטה באמצעות מושך מיקרופיפטה כדי להשיג התנגדות סופית של 5 עד 6 מגה אוהם.

מלאו את הפיפטה ב -3 עד 4 מיקרוליטר של תמיסה פנימית, ואז הניחו את התמיסה על קרח. לאחר מכן, דמיין את התאים באמצעות מצלמת CCD תחת IR-DIC. מקם את הפיפטה על קרום התא באמצעות מיקרומניפולטור. שמור על לחץ חיובי דרך יציאת יניקה ע