הקלטת זרמים סינפטיים בצומת הנוירומוסקולרית של זחל דרוזופילה

הניחו צלחת פטרי המכילה זחל דרוזופילה מנותח עם שרירים חשופים וענפי עצב על במת המיקרוסקופ.

הכנס אלקטרודת ייחוס לתמיסת אמבטיה בתוך צלחת הפטרי.

מלאו אלקטרודת הקלטה בתמיסה איזוטונית.

בעזרת מיקרומניפולטור, מקם אלקטרודה זו על שריר בטן המועצב על ידי נוירונים מוטוריים.

הניחו את קצה האלקטרודה על בוטון סינפטי, מבנה בקצה האקסון שמכיל מוליכים עצביים.

הקלט באופן רציף זרמי צומת מעוררים זעירים או mEJCs, שהם תגובות לשחרור נוירוטרנסמיטר ספונטני.

הטווח הנכון של משרעת mEJC מאשר את מיקום האלקטרודה הנכון.

לאחר מכן, מקם אלקטרודת גירוי ליד האקסון שמעצבבת את השריר הממוקד.

הפעל לחץ שלילי כדי למשוך את האקסון בתוך האלקטרודה.

הגדל בהדרגה את זרם הגירוי כדי לגרום לפוטנציאל פעולה.

זה מפעיל את האקסון לשחרר נוירוטרנסמיטורים בצומת העצבי-שרירי, שנרשמים כזרמים סינפטיים.

מניחים את צלחת הפטרי עם התכשיר על במת המיקרוסקופ. הכנס את אלקטרודת הייחוס לאמבטיה. מלאו את אלקטרודת ההקלטה בתמיסת HL3. תחת המטרה פי 10, טבלו את האלקטרודה באמבטיה, והניחו אותה על שרירים 6 ו-7 מקטעי הבטן 2, 3 או 4 באמצעות המיקרו-מניפולטור.

לאחר מכן, העבר את המטרה ל-60X והתמקד באזור העניין באמצעות אופטיקה אפי-פלורסנציה או DIC. הנח את קצה האלקטרודה על גבי הבוטונים הסינפטיים, ולאחר מכן, לחץ את האלקטרודה בעדינות רבה על השריר מכיוון שלחץ מוגזם עלול לפגוע ב- NMJ או לגרום לעלייה בפעילות הסינפטית הספונטנית.

לאחר מכן, הפעל את המגבר, לוח ה-AD והמחשב. לאחר מכן, בחר את מצב מהדק המתח במגבר. הפעל את תוכנת הרכישה, ובחר במצב ללא פערים, וצפה במראה של mEJCs על מסך המחשב. ודא שהמשרעת של ה-mEJCs היא בטווח של 0.2 עד 0.7 ננו-אמפר.

בעזרת מיקרו-מניפולטור תחת בקרה חזותית, מקם את אלקטרודת הגירוי ליד האקסון המעצבב את מקטעי הבטן 2 עד 4. הפעל לחץ שלילי על ידי משיכת הבוכנה של המזרק המחובר למחזיק האלקטרודה, כך שהאקסון נמשך בתוך האלקטרודה.

לאחר מכן, הפעל את הממריץ. סובב את הכפתור ביחידת הבידוד כדי להגדיר זרם אפס, ולאחר מכן, הגדל אותו בעדינות עד להופעת ה-EJC, או עד להגעה לסף. בצע את הגירוי במשטר על-סף, כאשר זרם הגירוי גדל בערך פי שניים בהשוואה לסף התצפית על EJC.