אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:34 דק׳ • July 8th, 2025
קחו פרוסה עטרתית של האיבר הוומרונזאלי הכימו-סנסורי מעכבר טרנסגני המבטא נוירונים חושיים בעלי תווית פלואורסצנטית.
האפיתל החושי מכיל את הנוירונים המסומנים הללו, החשופים ללומן המחובר לחלל האף לצורך חישת רמזים כימיים.
אבטח את הפרוסה בתא הדמיה באמצעות עוגן פרוסה.
העבר את החדר למערך הקלטה וזרם תמיסה חוץ-תאית מחומצנת כדי לשמור על כדאיות הרקמות.
מקם פיפטת זלוף ליד הפרוסה כדי להכניס גירויים כימיים ופיפטה מקליטה מעל הנוירונים החושיים.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, זהה את הנוירונים המסומנים
הפעל לחץ חיובי כדי למנוע סתימת פיפטה, והתקרב לנוירון עד שנוצרת גומה על הממברנה.
עבור ללחץ שלילי, משוך את הממברנה לתוך הפיפטה.
הפעל יניקה כדי לקרוע את הממברנה וליצור המשכיות עם הציטופלזמה, הנקרא מהדק תיקון של תא שלם, המאפשר הכנסת גירויים כימיים ורישום האותות האלקטרופיזיולוגיים המתקבלים.
העבר פרוסת VNO לתא ההדמיה, וקבע את מיקום הפרוסה באמצעות עוגן נירוסטה המחובר לסיבים סינתטיים בעובי 0.1 מילימטר. אין לכסות את פרוסת הרקמה באף אחד מחוטי הסיבים הסינתטיים. לאחר מכן, העבירו את תא ההדמיה למערך ההקלטה, והיכוך רציף של הפרוסה עם S2 מחומצן בטמפרטורת החדר.
התאם את נימי היניקה לפני השטח של התמיסה כדי ליצור החלפה מתמדת של תמיסת אמבטיה. לאחר מכן, כוונן את עיפרון הזלוף הרב-חבית 8 ב-1 מעל וקרוב לחלק הלא חושי של פרוסת ה-VNO המכילה את כלי הדם. לאחר מכן, חבר את אלקטרודת הייחוס ותמיסת האמבטיה באמצעות גשר האגר בצורת L המלא באשלגן כלורי 150 מילימולרי.
לאחר מכן, מלאו את פיפטת התיקון בתמיסת פיפטה S4. התקן את הפיפטה מעל האלקטרודה המצופה כלוריד כסף המחוברת לראש tagמבלי לגרד את הציפוי, והצמד היטב. לאחר מכן, הפעל לחץ חיובי קל על פיפטת התיקון לפני הכניסה לאמבטיה. עקוב אחר הפיפטה, וודא שהיא בין ארבעה מגה-אוהם ל-10 מגה-אוהם.
דמיין את פרוסת ה-VNO עם מצלמת CCD באמצעות DIC מותאם לאינפרא אדום, וזהה תאים המבטאים FPR-rs3-i-Venus, או נוירונים בעלי תוויות דומות באמצעות תאורה פלואורסצנטית, וקוביית פילטר מתאימה. התקרב לגוף התא באמצעות גלגלי יד לרגישות מרבית. בשל הלחץ החיובי, שקע קטן בקרום הסומה של התא נראה לעין, ברגע שקצה הפיפטה נמצא בסמיכות.
לאחר מכן, שחרר את הלחץ החיובי והפעל לחץ שלילי קל כדי לשאוב את קרום התא, על מנת להשיג איטום התנגדות גבוה של 1 עד 20 ג'יגה-אוהם. לאחר מכן, הפעל יניקה קצרה ועדינה כדי לשבש את קרום התא ולבסס את תצורת התא השלם.