השתלת מכלול אלקטרודות במוח עכבר לצורך רישום אלקטרופיזיולוגי

אבטח עכבר מורדם על מסגרת סטריאוטקסית המכילה כרית חימום לשמירה על טמפרטורת הגוף.

יש למרוח חומר סיכה כדי למנוע התייבשות בעיניים ולהזריק תמיסת אלקטרוליטים תת עורית לשמירה על לחות.

הסר את הפרווה מהקרקפת, חטא את האזור והזריק משכך כאבים תת עורי כדי להפחית את הכאב.

בצע חתך כדי לחשוף את הגולגולת, ואז נקה אותה כדי להפוך את ציוני הדרך האנטומיים לגלויים לזיהוי אזורים במוח.

מרחו דבק דנטלי והקשו אותו באמצעות אור ריפוי כדי לסייע בהשתלת אלקטרודות.

קדחו חורים מעל ההיפוקמפוס והמוח הקטן, והרכיבו מכלול אלקטרודות באמצעות מחזיק על המסגרת הסטריאוטקסית.

האלקטרודות הדו-קוטביות מתעדות את פעילות ההיפוקמפוס, בעוד שאלקטרודה ייחוס מקבלת פעילות בסיסית מהמוח הקטן.

הכנס את האלקטרודות, אבטח את המכלול עם מלט דנטלי ונתק מהמחזיק.

יש לתת את תמיסת האלקטרוליטים ושוב משכך כאבים.

אפשר לעכבר להתאושש לחלוטין לפני ביצוע רישום אלקטרופיזיולוגי.

לפני שתמשיך בניתוח, רשום את משקלם של עכברי VGAT-Cre בני 8 שבועות. לאחר מכן, הנח את החיה בתא אינדוקציה כדי לגרום להרדמה. הנח את העכבר המורדם על כרית חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. אם משתמשים במערכת טמפרטורה מבוקרת משוב, הכנס את בדיקת הטמפרטורה לתוך פי הטבעת של החיה לניטור טמפרטורה במהלך הניתוח. כדי להתחיל את הניתוח, יש לכוון מחדש את זרימת ההרדמה הנדלנית אל חרוט האף ולהרכיב את החיה במסגרת הסטריאוטקסית על ידי הנחת השיניים העליונות הקדמיות בעדינות לתוך המוט החותך ולהעביר את החרוט על אפו, ואז למקם את מוטות האוזניים לתוך האוזניים ולהצמיד למסגרת הסטריאוטקסית.

ודא שראש החיה מפולס וממורכז ולא ניתן להזיז אותו כאשר הוא נבדק מעט. לאחר הרכבה של בעל החיים, יש להזריק 0.5 מיליליטר נורמוזול על העכברים להתייבשות ולמרוח חומר סיכה לעיניים כדי למנוע ייבוש בקרנית. עקוב אחר עומק ההרדמה על ידי צביטה של הבוהן האחורית. אם רפלקס הנסיגה נעדר אצל החיה, המשך להסיר את שיער הקרקפת של העכבר סביב אזור הניתוח. בסיום, יש לחטא את אזור העור הנקי שלוש פעמים במריחה לסירוגין של אתנול ויוד בגימור יוד, ולהזריק 0.05 מיליליטר של 0.25% בופיבקאין תת עורית.

בצע חתך בגולגולת באמצעות אזמל, ולאחר מכן גזר חלק מהעור בעזרת מספריים כירורגיים החושפים את הגולגולת. דחוף את העור הצידה לפני ניקוי הגולגולת מכל הרקמות הבסיסיות בעזרת צמר גפן. נקו את הגולגולת במי חמצן באמצעות צמר גפן סטרילי, והפכו את תפרי הגולגולת, הברגמה והלמבדה לגלויים. עם המקדחה המותקנת באופן סטריאוטקסי, הזז את קצה המקדחה על ברגמה ואפס קואורדינטות x, y ו-z, ולאחר מכן, הרם והעבר את המקדחה ללמבדה כדי לקבוע את הקואורדינטות שלו כדי לקבוע אם הראש ישר.

לאחר ייבוש יסודי של הגולגולת, יש למרוח טיפה אחת של דבק דנטלי עם חריטה עצמית עם המוליך. המתן 60 שניות לפני ריפוי הדבק הדנטלי עם אור UV דנטלי למשך 40 שניות. משטח מבריק מעיד על כך שהדבק נקשר ביעילות עם הגולגולת. בעזרת מקדח בגודל 0.031 אינץ', קדחו בזהירות שני קידוחים דו-צדדיים לתוך הגולגולת במהירות של 5,000 סיבובים לדקה, או סל"ד, והימנעו מקידוח לתוך המוח. מרחו טיפת מלח כדי לשפר את קידוח חורי הקוצים. להשתלת אלקטרודות בעומק ההיפוקמפוס, יש לקדוח בגובה 3 מילימטרים אחוריים ו -3 מילימטרים לרוחב מברגמה.

קדחו חור קוצים אחד לאלקטרודת הייחוס מעל המוח הקטן, מאחורי הלמבדה בגובה 6 מילימטרים אחוריים ו-0 מילימטרים לרוחב מברגמה. לאחר מכן, הרכיב את הדום בעל ששת הפינים עם אלקטרודות מורכבות למחזיק האלקטרודה על מסגרת סטריאוטקטית. על ידי יישור האלקטרודות מעל חורי הקוצים המתאימים, הורד לאט ונווט את האוזניות כדי לאתר את שני קצות האלקטרודות הדו-קוטביות ממש על גבי חורי ההיפוקמפוס השמאלי והימני, ובמידת הצורך, כוונן את אלקטרודת הייחוס כך שתרחף מעל החור, מעל המוח הקטן.

כאשר אלקטרודות הפיתול של ההיפוקמפוס נמצאות ממש מעל החורים, אפסו את ציר ה-z, והורידו לאט את האלקטרודה למינוס שלושה מילימטרים לתוך ההיפוקמפוס הימני והשמאלי, והנחו את אלקטרודת הייחוס לתוך החור שמעל המוח הקטן. הכן את המלט הדנטלי על ידי ערבוב האבקה והנוזל בקערת ערבוב, ולאחר מכן כסה את משטח הגולגולת, האלקטרודות והרווח בין משטח הגולגולת לתחתית הכן במלט דנטלי.

לאחר שהמלט מתייבש ומתקשה, נתק את מחזיק האלקטרודה מהזרוע הסטריאוטקטית, הרם את הזרוע והסר את המחזיק מהכן. לאחר מתן העכבר תת עורי עם קטופרופן ונורמוזול, הסר את החיה מהמסגרת הסטריאוטקטית כדי להעביר את החיה אל הכרית המחוממת בכלוב הוויווריום. לאחר התעוררות מלאה, החזירו את החיה הבודדת לכלוב הוויווריום, האכילו את החיה במזון רך ועקבו אחר הירידה במשקל מדי יום עד 72 שעות לאחר הניתוח.