אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:17 דק׳ • July 8th, 2025
הנח כיסוי המכיל תרבית משותפת בתא הקלטה עם תמיסה חוץ-תאית מחומצנת.
התרבות המשותפת מורכבת מאסטרוציטים, נוירונים בקליפת המוח של חולדות המבטאים תעלות יונים רגישות לאור שהתמזגו לחלבון פלואורסצנטי, ונוירונים שמקורם ב-iPSC המבטאים חלבון פלואורסצנטי אחר.
באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי, זהה נוירון פלואורסצנטי שמקורו ב-iPSC.
קדם פיפטה הקלטה מלאה בתמיסה תוך-תאית לכיוון הנוירון כדי ליצור תצורה של תא שלם.
שמור על פוטנציאל ממברנה שלילי קבוע למדידות זרם מדויקות.
להאיר את התרבות המשותפת באור כדי להפעיל תעלות יונים רגישות לאור בתאי העצב בקליפת המוח, ובכך ליצור פוטנציאל פעולה.
פוטנציאל הפעולה גורם לשחרור נוירוטרנסמיטר לתוך הסדק הסינפטי.
אם הם מחוברים סינפטית, המוליכים העצביים נקשרים לקולטנים על הנוירון שמקורו ב-iPSC, פותחים תעלות יונים ויוצרים זרמים פוסט-סינפטיים.
זרמים פוסט-סינפטיים מוגברים בתאי עצב שמקורם ב-iPSC בעקבות גירוי אור מאשרים קשרים סינפטיים עם נוירונים בקליפת המוח.
השתמש במיקרוסקופ קונפוקלי המצויד בעדשת טבילה במים פי 60. מחדירים את התאים בטמפרטורת החדר בתמיסה חיצונית, מבעבעים כל הזמן עם 95% חמצן, 5% פחמן דו חמצני. השתמש בתמיסה פנימית למילוי המיקרו-פיפטה של ההקלטה.
כדי לבצע גירוי אופטוגנטי, תקן תא חיובי tdTomatoto במצב תא שלם והגדר את מהדק המתח על שלילי 70 מילי-וולט. עם מנורת כספית בשדה שלם ומסנן עירור של 480 על 40, עורר את כל השדה למשך 30 שניות. רשום זרמים פוסט-סינפטיים, או PSCs, של תא טלאי המושרה על ידי גירוי פוטו של נוירונים בקליפת המוח הפרה-סינפטיים המבטאים ChR2.