הדמיה של איתות סידן המושרה על ידי ניקוטין לאורך אקסונים של ההיפוקמפוס הגחוני בתרביות סינפטיות

קחו תרביות משותפות מהונדסות גנטית של פרוסות היפוקמפוס גחוני של עכבר ונוירונים של גרעין אקומבנס על גבי כיסוי.

נוירוני ההיפוקמפוס מקרינים מסופי אקסון קדם-סינפטיים המבטאים יתר על המידה קולטני אצטילכולין ניקוטיניים, ויוצרים סינפסות עם נוירוני הגרעין הפוסט-סינפטי האקומבנס.

נוירונים נטענים בצבע אינדיקטור סידן למדידות סידן תוך תאיות.

העבר את הכיסוי לתא מיקרוסקופ קונפוקלי מלא במאגר המכיל יוני סידן.

צלם תמונות פלואורסצנטיות של הקרנות אקסונליות בהיפוקמפוס כבקרה.

ניקוטין מחלחל, שנקשר לקולטני האצטילכולין הניקוטיניים על נוירונים בהיפוקמפוס, ומעורר זרם סידן.

יוני הסידן נקשרים לצבע התוך תאי, ומגבירים את הקרינה.

אקסונים בהיפוקמפוס משחררים נוירוטרנסמיטורים מעוררים, ויוזמים העברה סינפטית בנוירונים של גרעין האקומבנס.

שוטפים עם חיץ כדי להסיר ניקוטין.

עם הזמן, הפעלת קולטן אצטילכולין ניקוטיני גורמת לשחרור סידן ממאגרים תוך-תאיים, מה שמוביל לפלואורסצנטיות מוגברת של צבע ומצביע על איתות סידן מתמשך לאורך האקסונים של ההיפוקמפוס הגחוני.

העבירו את התרביות אחת בכל פעם לתא ההדמיה. אסוף את התמונות הפלואורסצנטיות הבסיסיות של הקרנות אקסונליות מפרוסות המיקרו של ההיפוקמפוס הגחוני כבקרת טרום ניקוטין.

לאחר מכן, מרחו מיקרוטולר אחד של ניקוטין על ידי זלוף מהיר במהירות של 2 מיליליטר לדקה למשך דקה אחת, ולאחר מכן, שטפו את הני