רישום פוטנציאלים פוסט-סינפטיים מעוררי שדה עצבי בפרוסות היפוקמפוס חריפות

הנח פרוסת היפוקמפוס של עכבר לתוך תא טבילה מלא בנוזל מוחי מלאכותי, או aCSF.

אבטח את הפרוסה עם רשת אחיזה כדי למנוע תנועה.

הפצת aCSF מחומצן באופן רציף כדי לשמור על כדאיות עצבית.

התקן אלקטרודות ייחוס כדי לספק כרך יציבtagהתייחסות.

מקם את אלקטרודות הגירוי וההקלטה בקו אחד ובמקביל לשכבת הפירמידלה CA1 בהיפוקמפוס.

הפעל פולסים חשמליים.

פולסים אלה מגרים את הנוירונים, גורמים לפתיחת תעלות יונים מגודרות מתח, מאפשרים ליונים חיוביים לזרום פנימה ומפעילים פוטנציאל פעולה.

פוטנציאל פעולה זה מתפשט לאורך הנוירונים וגורם לשחרור נוירוטרנסמיטורים מעוררים לתוך הסדק הסינפטי.

המוליכים העצביים נקשרים לקולטנים ספציפיים על הנוירונים הפוסט-סינפטיים, ומאפשרים זרם יונים חיובי וכתוצאה מכך שינוי בפוטנציאל הממברנה - הפוטנציאל הפוסט-סינפטי המעורר, או EPSP.

אלקטרודת ההקלטה מודדת את ה-EPSP מאוכלוסיית נוירונים באזור ההקלטה - EPSP השדה.

משרים מראש פיסה קטנה של נייר ניקוי עדשות ורשת ניילון קבועה על חוט פלטינה בצורת U בתא פרוסות הטבילה למשך מספר דקות. לאחר מכן, הסר את חוט הפלטינה בצורת U. כבה את המיחזור והנח פרוסה על נייר ניקוי העדשות. לאחר מכן, הנח מיד את הרשת המחזיקה את הפרוסה על גבי הפרוסה.

הפעל את המשאבה ותן לפרוסה להתייצב למשך 30 דקות מבלי לטבול את המטרה ב-ACSF. בינתיים, מלאו את אלקטרודת ההקלטה ב-ACSF, והרכיבו אותה לתוך מחזיק הפיפטה.

לאחר מכן, הנח את אלקטרודת גירוי הטונגסטן המבודדת באפוקסי שנבדקה במחזיק המניפולטור, ואת חוט הייחוס בתא הפרוסה. הוסף אלקטרודת ייחוס שנייה לתא וחבר אותה לשקע הייחוס של שלב הראש של אלקטרודת ההקלטה.

ב ampתוכנת בקרת חיים יותר, לחץ על אפס clamp מצב תיבה, ולאחר מכן לחץ פעמיים על רשימת רווח פלט תיבה. בחר רווח של 100. לחץ פעמיים על תיבת הסינון הגבוהה בסל. בחר 3 קילו-הרץ ולחץ פעמיים על תיבת רשימת מסנני מעביר נמוך AC כדי לבחור 0.1 הרץ.

בתוכנת ההקלטה, לחץ על רכוש פרוטוקול פתוח. בחר פרוטוקול שיש לו את ההגדרות המאפשרות גירויים אפיזודיים ודיגיטציה של פוטנציאלים מוגברים ב-10 עד 20 קילו-הרץ למשך 50 עד 100 אלפיות השנייה, ושמפעיל אוטומטית מבודד גירוי 10 אלפיות השנייה לאחר תחילת הקלטה אפיזודית.

הנח את אלקטרודות הגירוי וההקלטה בקו ובמקביל לשכבת הפירמידלה. לאחר מכן, לחץ על רכוש ערוך פרוטוקול ובחר את טריגר הכרטיסייה בחלון המוקפץ. לחץ על התיבה מקור טריגר ובחר מקש רווח כמקור הטריגר. לאחר מכן, לחץ על בסדר כפתור ולחץ על הקלט כפתור כדי להתחיל ברכישה.

בתוכנת מבודד הגירוי, לחץ על תיבת בקרת המתח והזן אפס. לחץ על כפתור ההורדה. לאחר מכן, לחץ על תוכנת הקלטה חלון ולחץ על מקש הרווח. חזור על מחזור זה על-ידי הזנה רציפה של ערכים מ- 1,000 עד 8,000. מתאם את עוצמת הגירוי עם ערכי שיפוע FEPSP וקובע את עוצמת הגירוי הנדרשת כדי לקבל 40% מהשיפוע המקסימלי של FEPSP. לחץ על התיבה בקרת מתח והזן את הערך שנקבע. לאחר מכן, לחץ על כפתור ההורדה.

בתוכנת ההקלטה, לחץ על תפסיק כפתור ולאחר מכן על תפריט Acquire. לחץ על ערוך פרוטוקול ובחר בכרטיסייה טריגר בחלון המוקפץ. לאחר מכן, לחץ על מקור טריגר תיבה ובחר את טיימר פנימי כמקור הטריגר. לחץ על כפתור אישור, ואחריו כפתור הקלט שמתחיל את ההקלטה האוטומטית של פוטנציאל השדה כל 60 שניות. לחץ על תפסיק כפתור לאחר 30 עד 60 דקות.

בתוכנת ההקלטה, לחץ על Acquire Open Protocol ובחר את אותו פרוטוקול כמו ההקלטה הבסיסית. לחץ על הלחצן אישור ולאחר מכן לחץ על הקלט. המשך להריץ אוטומטית את ההקלטות הפוטנציאליות בשטח למשך שעתיים עד ארבע שעות. בסיום, לחץ על תפסיק כפתור כדי לסיים את ההקלטה.