אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:58 דק׳ • July 8th, 2025
אבטח פרוסת מוח בתא הקלטה עם זלוף רציף של aCSF המכיל מגנזיום גבוה החוסם קולטני N-methyl-D-aspartate או NMDA glutamate.
מקם את האלקטרודות המגרות וההקלטה בשכבה הרדיואטומית של ההיפוקמפוס Cornu ammonis 1 או CA1.
לעורר כדי להשיג אות חשמלי, המאשר קשרים עצביים שלמים.
מקם מחדש את האלקטרודה המגרה לשכבה האוריאנית ואת אלקטרודת ההקלטה לשכבה הפירמידלית, ולאחר מכן הכנס אותם עמוק יותר.
החל גירויים טטניים, פולסים חשמליים בתדר גבוה כדי לגרום לשחרור גלוטמט נוירוטרנסמיטר מעורר מאקסונים צדדיים של Schaffer.
גלוטמט נקשר לקולטני גלוטמט בתאי עצב CA1, מה שמקל על זרם נתרן ודפולריזציה של הממברנה.
זה משחרר את החסימה של קולטני NMDA, מאפשר זרימת נתרן וסידן ומשפר את עירור הנוירונים.
האינטרנוירונים הנרגשים בשכבה משחררים את המוליך העצבי המעכב GABA, המקיים אינטראקציה עם נוירונים CA1.
איזון זה של קלט מעורר ומעכב מוביל לעירור מבוקר מסונכרן של הרשת העצבית CA1, ויוצר גלי מוח קצביים הנקראים תנודות גמא, החיוניים לקשב ולזיכרון.
כדי להרכיב את הפרוסה בתא ההקלטה, הנח פרוסת מוח לתוך תא הקלטה שקוע ב-ACSF הזורם במהירות של 1 עד 2 מיליליטר לדקה ומחומם ל-32 מעלות צלזיוס. ה-ACSF המשמש להקלטות שונה מזה שבתא ההחזקה, מכיוון שריכוז המגנזיום גדל מ-2 מילי-מולר ל-4 מילי-מולארי.
אבטח את הפרוסה על ידי הנחת משקולת נירוסטה חצי עגולה עליה עם הגדילים שלה במקביל להיפוקמפוס CA1. לאחר מכן, הגדל את מהירות הזלוף ל -8 עד 10 מיליליטר לדקה ב -32 מעלות צלזיוס.
בעזרת מיקרוסקופ מנתח, העבירו את האלקטרודה המגרה לאמצע שכבת האוריינס. לאחר מכן, העבר את אלקטרודת ההקלטה לשכבת הפירמידה קרוב ככל האפשר לאלקטרודה המגרה. לאחר מכן, הורד את האלקטרודות המגרות וההקלטה 50 עד 100 מיקרומטר לתוך הפרוסה על מנת ליצור את השדה EPSP של 1 מילי-וולט בתגובה לדופק הבדיקה של 120 עד 150 מיקרו-אמפר.
כדי ליצור תנודות גמא, יש לעורר את הרקמה באמצעות רכבת של 20 פעמים פולסים של 0.1 אלפיות השנייה המועברים ב-200 הרץ. גירוי טטני זה יכול להניב תגובות הניתנות לשחזור כאשר הוא מועבר כל 5 דקות.