גירוי שורש עצב שמיעתי והקלטות זרם פוסט-סינפטי בפרוסת טריז במוח עכבר

אבטח פרוסת טריז מוח של עכבר טרנסגני בתא הקלטה עם aCSF מחומצן.

צד הטריז העבה יותר מכיל את שורש עצב השמיעה וגרעין השבלול, כולל כוכב T ותאי שיחים כדוריים.

הצד הדק יותר מכיל את הגרעין המדיאלי והגחוני של גוף הטרפז עם נוירונים אוליבוקוצ'לאריים מדיאליים פלואורסצנטיים.

אתר מיקרוסקופית את שורש עצב השמיעה ומקם עליו אלקטרודה מגרה.

זהה נוירון אוליבוקוצ'לארי מדיאלי פלואורסצנטי וקדם אליו פיפטה מקליטה.

טלאי את הנוירון כדי להשיג תצורה של תא שלם ולתעד את הפעילות החשמלית שלו.

להפעיל פולסים חשמליים על שורש עצב השמיעה, ולהפעיל תאי גרעין שבלול.

תאי כוכב T מופעלים משחררים נוירוטרנסמיטורים מעוררים לנוירונים האוליבוקוצ'לאריים המדיאליים.

עם זאת, תאים עבותים כדוריים מפעילים מסלולים מעכבים, ומשחררים נוירוטרנסמיטורים מעכבים לנוירונים האוליבוקוצ'לאריים המדיאליים.

השילוב של האותות המעוררים והמעכבים מביא לזרמים פוסט-סינפטיים, המאשרים פעילות עצבית בתוך הפרוסה.

כדי להגדיר את פרוסת הטריז לניתוח אלקטרופיזיולוגיה, הנח את הדגימה בתא הקלטה שמתמלא ברציפות ב-35 מעלות צלזיוס aCSF וייצב את הפרוסה. באמצעות אופטיקה של DIC, התמקד בשורש עצב השמיעה בצד העבה של הפרוסה, והשתמש במיקרומניפולטור כדי להעביר את האלקטרודה המגרה טונגסטן דו קוטבית לשורש עצב השמיעה ובעדינות אל פני הרקמה.

העבר את שדה הראייה לגרעין הגחון של גוף הטרפז בצד הדק, ובחר נוירון אוליבוקוצ'לארי מדיאלי כמטרה לאלקטרופיזיולוגיה של מהדק טלאי תחת אפיפלואורסצנציה באמצעות מסנן פליטה של 561 ננומטר. מלאו פיפטה הקלטה בתמיסה הפנימית המתאימה לניסוי המוצע, ותחת אופטיקה של DIC, טלאו והקליטו מהנוירון האוליבוקוצ'ליארי המדיאלי בתצורת התא השלם.

התאם את משרעת הגירוי החשמלי של שורש עצב השמיעה כדי להשיג אירועים פוסט-סינפטיים עקביים בתא העצב המדיאלי. לאחר מכן, הפעל פרוטוקולי גירוי מתאימים כדי לצפות בזרמים סינפטיים מעוררים בתאי עצב אוליבוקוצ'לאריים מדיאליים.