אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:42 דק׳ • July 8th, 2025
הנח תכשיר עצבי-שרירי חי של זחל דרוזופילה בתא הקלטה המכיל מי מלח נטולי סידן.
נוירוני הזחל מבטאים תעלת קטיון רגישה לאור.
עברו לתמיסת מלח בתוספת סידן המכילה צבע פלואורסצנטי.
הצבע זוהר חלש במצב לא מופנם אך חזק כאשר הוא מופנם על ידי הנוירונים.
האירו את הזחל באור כחול.
זה מפעיל את הערוץ, גורם לזרם קטיונים ודפולריזציה של נוירונים, ויוזם פוטנציאל פעולה.
פוטנציאל הפעולה מגיע לטרמינל הסינפטי בצומת העצבי-שרירי, ומאפשר זרימת סידן ואקסוציטוזיס שלפוחית.
לאחר מכן, הממברנה הקשורה לצבע מופנמת במהלך מיחזור השלפוחית.
יש לשטוף במי מלח ללא סידן כדי לעצור את מיחזור השלפוחית ולהסיר כל צבע שאינו מופנם.
דמיין את אות הקרינה.
לאחר מכן, הכניסו תמיסת מלח ללא צבע בתוספת סידן והאירו שוב.
זה גורם לפוטנציאל פעולה נוסף, זרם סידן ואקסוציטוזיס שלפוחית המכיל צבע.
דמיין את האות שוב.
שחרור הצבע עקב אקסוציטוזיס שלפוחית מפחית את הקרינה בהשוואה למצב במהלך הפנמת השלפוחית.
לגירוי channelrhodopsin, חבר נורית LED כחולה לממריץ הניתן לתכנות באמצעות כבל קואקסיאלי והנח את ה-LED ביציאת המצלמה. מקד את אלומת אור ה-LED הכחולה על התכשיר עם צבע FM באמצעות פונקציית זום המיקרוסקופ.
השלב הקריטי ביותר בשלב זה בהליך הוא לוודא שהגדרות ה-LED נשמרות קבועות, ושאתה מאיר את אותו חלק של כל בעל חיים עבור כל התנאים המושווים כדי להבטיח חוזק גירוי עקבי.
התחל את הגירוי הקל, ועקוב עם הטיימר למשך הזמן שנקבע מראש של תקופת הגירוי האופטוגנטי. כאשר הטיימר נעצר, הסר במהירות את תמיסת צבע ה-FM והחלף אותה במי מלח נטולי סידן כדי לעצור את מחזור ה-SV. לפריקת צבע FM, התחל את גירוי האור ועקוב עם הטיימר למשך הזמן שנקבע מראש של תקופת הגירוי האופטוגנטי. כאשר תקופת הטיימר מסתיימת, הסר במהירות את תמיסת צבע ה-FM והחלף אותה במי מלח נטולי סידן כדי לעצור את מחזור ה-SV.