הערכה של סינפסות ברצועת הכלים באזורי תדר ספציפיים של שבלול העכבר

התחילו עם שפופרות המכילות סיבובי שבלול של עכברים שטופלו מראש עם חומר מחלחל וחומר חוסם המונעים אינטראקציות לא ספציפיות.

כל תור מזהה תדרי קול שונים ומכיל תאי שיער הממירים קול לאותות חשמליים. אותות אלה מועברים באמצעות נוירוטרנסמיטורים בסינפסות סרט לעצב השמיעה.

הסר את התמיסה והוסף נוגדנים ראשוניים המקיימים אינטראקציה עם חלבונים בשיער ובתאי עצב בסינפסות הסרט, ולאחר מכן שטוף.

דגירה עם נוגדנים משניים המתויגים בפלואורופורים אדומים וירוקים, הנקשרים לנוגדנים הראשוניים שלהם.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים משניים לא קשורים.

הנח את הדגימה על שקופית זכוכית עם מדיום הרכבה המכיל צבע גרעיני כדי להכתים את הגרעינים בכחול.

הרכיב את הכיסוי. יבש אותו, ואז השתמש במיקרוסקופ קונפוקלי כדי לצלם כל קטע בעומקים שונים.

סינפסות הסרט מופיעות כפונקטה במיקום קרוב באדום וירוק.

ספור את הפונקטה הפונקציונלית הללו בכל תור כדי לתאם את תגובתם לתדר הקול.

לאחר הדיסקציה, הנח כל סיבוב שבלול לצינורות צנטריפוגה בודדים של 2.5 מיליליטר. חסום כל קשירה לא ספציפית עם 10% סרום עיזים ב-PBS ב-0.1% Triton X-100 למשך שעה בטמפרטורת החדר על מסובב.

בתום הדגירה, השתמש בקצה פיפטה של 200 מיקרוליטר כדי להסיר את התמיסה תחת מיקרוסקופ דיסקציה. דגרו את הדגימות עם הנוגדנים העיקריים המעניינים מדוללים ב-5% סרום עיזים ב-PBS ו-0.1% טריטון X-100 למשך הלילה ב