אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:41 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם מכשיר מיקרופלואידית מצופה למינין וממודר הממוקם מעל מערך רב-אלקטרודות מעוצב או MEA.
המכשיר נושא נוירונים גלוטמטרגיים בקליפת המוח שמקורם ב-iPSC המודבקים למיקרו-אלקטרודות של MEA.
נוירונים אלה מתקשרים באמצעות אותות חשמליים. רשום את האותות האלה כפעילות עצבית בסיסית.
לאחר מכן, זרעו את המכשיר בתאי גליומה בדרגה גבוהה בילדים עשירים בגלוטמט, סוג של תא גידול במוח, ודגרו.
עם הזמן, תאי גליומה נכנסים לתעלה ומתחברים ויוצרים את התרבות המשותפת. מאוחר יותר, תאי גליומה משחררים גלוטמט, מוליך עצבי מעורר.
הגלוטמט המשוחרר מקיים אינטראקציה עם קולטנים עצביים, מה שמוביל לזרם של יוני סידן ונתרן הגורם לדפולריזציה של הממברנה העצבית.
זה גורם לריגוש עצבי ומשפר את הפעילות העצבית.
הקלט מחדש את האותות החשמליים, ועלייה משמעותית לאחר תרבית משותפת מצביעה על אינטראקציה מוצלחת של תאי עצב וגליומה.
זרע את תאי UW479 ו-BT35 הטריפסינים על גבי הנוירונים הגלוטמטרגיים הדבקים הבוגרים בכל מכשיר מיקרופלואידי. שמור על התרביות המשותפות במשך יומיים בסביבה מבוקרת ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני עם נוירון גלוטמטרגי D11 ואילך.
ספרו תאי גליומה בדרגה גבוהה בילדים באמצעות התמונות המיקרוסקופיות שנותחו באמצעות תוכנת ניתוח התמונה כדי להעריך את כדאיותם, ולחשב את אחוז התאים. הנח את ה-MFD במכשיר ההקלטה, והשתמש בתוכנה זמינה מסחרית כדי לבצע את הרישום האלקטרופיזיולוגי של נוירונים גלוטמטרגיים ביום ה-21.
לפני זריעת תאי גליומה בדרגה גבוהה בילדים, בצע רישום אלקטרופיזיולוגי שני של הנוירונים הגלוטמטרגיים המובחנים שגודלו כביקורת, במקביל לתרבית המשותפת.