Name: CD4 + T-לימפוציטים לכידת באמצעות שבב Microfluidic פנויה ל-HIV (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: למד ללכוד לימפוציטי T עוזרים חיוביים ל-CD4 מדגימות דם באמצעות מכשיר מיקרו-נוזלי מבוסס PDMS. שיטה זו מאפשרת ניתוח תאים מדויק בסביבות עם משאבים מוגבלים למחקר אימונולוגי ואבחון HIV.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ערוץ microfluidic עם משטח + אנטי CD4 biotinlayted. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 10 מ&quot;ל של דם מדגם ב 5 מ&quot;ל / דקה לתוך התעלה microfluidic עם משאבת מזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הדם 20 מ&quot;ל / דקה במשך 20 דקות עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק פתרון FACS בדילול lysing (בדילול מלא 10% מן המניות עם פתרון PBS) בשעה 5ul/min במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה של 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק CD3 העיקרי + פתרון נוגדן (בדילול מלא 10% מן המניות עם פתרון PBS) בשעה 5 מ&quot;ל / דקה במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה למשך 2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלאש החוצה עם ערוץ PBS ב 5 מ&quot;ל / דקה במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 20% AF488 CD4 + נוגדן, 0.2% פתרון DAPI מניות, ו -10% משני CD3 + נוגדן ב 5 מ&quot;ל / דקה במשך 20 דקות באותו זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה של 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הערוץ עם PBS ב 5 מ&quot;ל / דקה במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבן (אופטי) - שחור ולבן: תא ואבק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> UV (DAPI) - כחול: תא בלבד </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כחול (CD4 +) - ירוק: לימפוציטים מסוג T ו מונוציטים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גרין (CD3 +) - אדום: לימפוציטים מסוג T בלבד </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>מיקרו-ערוץ PDMS</td><td></td><td></td><td></td><td>יוצר באמצעות תבנית SU-8</td></tr><tr><td>דם</td><td></td><td></td><td></td><td>דם נתרם מנבד אנושי בריא. Mass General Hospital, 10 X WBC בצפיפות גבוהה או Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>בופר</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1x Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphated Buffered Saline.</td></tr><tr><td>תמיסת ליזיס ל-FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>מהולה ל-10% מתמיסת המקור עם PBS.</td></tr><tr><td>נוגדן Anti-CD4+ מסומן בביוטין</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>המשטח הוכנה עם נוגדן Anti-CD4+ מסומן בביוטין, מהולה ל-10% מתמיסת המקור עם PBS/BSA לאחר ערבוב עם 0.2mg תמיסת מקור ו-1ml מים דה-יוניים.</td></tr><tr><td>goat anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>מהולה ל-10% מתמיסת המקור עם PBS</td></tr><tr><td>rabbit anti-goat IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>נוגדן שני עבור נוגדן anti-CD3, מהולה ל-10% מתמיסת המקור עם PBS</td></tr><tr><td>anti-human CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>מסומן ב-Alexa Fluor 488, מהולה ל-20% מתמיסת המקור עם PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-phenylindole, תמיסת dihydrochloride, מהולה ל-0.2% מתמיסת המקור עם PBS.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-לימפוציטים לכידת באמצעות שבב microfluidic פנויה ל-hiv

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-לימפוציטים לכידת באמצעות שבב Microfluidic פנויה ל-HIV

שלום, שמי ריצ'רד לין ואני חוקר כאן בקבוצה של פרופסור TI Mercy בחטיבה למדעי הבריאות וטכנולוגיה של הרווארד MIT. הפרויקט שבו אני עובד הוא כימות ולכידה של לימפוציטים T חיוביים ל-CD4 וחיוביים ל-C3. דם של מטופלים ישמש בסביבות עם משאבים מוגבלים.כאן לפניי ישנו התקן מיקרופלואידי העשוי מ-PDMS, שזהו Polymethylsiloxane. גובה התעלה עצמה הוא 50 micrometers והנפח הכולל בהתקן הוא 10 microliter. זהו התקן מדויק ביותר שבו נשתמש כדי ללכוד לימפוציטים מסוג T helper.ביסודו של דבר, זהו מדד האבחנה עבור חולי HIV. פני השטח של המכשיר המיקרו-פלואידי כבר הוכשרו עם חלבון, ובמזרק נמצאים נוגדנים חיוביים ל-CD4. כעת יש לנו רק בופר ביולוגי PBS ב-pH של 7.4, ואנו נזרימה אותו לתוך התעלה כדי לשטוף את עודפי הנוגדנים החיוביים ל-CD4.בשלב זה, אין צורך לשלוט בקצב הזרימה כיוון שאנו רק מנסים לשטוף את השאריות ואין באמת חשיבות לקצב הזרימה שלנו. כאן יהיו הכניסות למכשיר, ואלו יהיו היציאות, משמאלי וממימינכם כאן. כעת אשטוף את תמיסת הנוגדנים העודפת, ואם תבחינו ביציאה, תוכלו לראות את הנוזל שיוצא; מדובר בכמות מזערית מאוד, אך אם תסתכלו מקרוב תוכלו לראות נוזל יוצא מהתעלה דרך הצינורית.כעת, לאחר ששטפנו את תמיסת הנוגדנים העודפת, אנו יכולים להתכונן להזרקת הדם. לכן, אני אנתק כעת את הצינור מהכניסה. כעת נפתח מזרק חדש עבור הדם, דם אנושי, דם מלא.מ

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

תא לכידת באמצעות מכשיר microfluidic

ניסוי זה הוא מדריך חזותי עבור ניצול שיבוט מולקולרי פלואורסצנטי של HIV עבור לחיות ניסויים הדמיה confocal.

חזותי Cell ל-תא העברה של HIV באמצעות המשובטים פלורסנט של HIV מיקרוסקופיה confocal חיים

פיתחנו וקטור lentiviral שיש לה, בנוסף LTR תאת מגיב, את אלמנט Rev-תגובה (RRE) כי ניתן לווסת את ביטוי הגן הכתב בצורה HIV-1 ו-תאת Rev-מותנה. וקטור מאפשר את זיהוי ספציפי של שכפול HIV בתאים חיים באמצעות ביטוי ה-GFP.

סימון ספציפיות של HIV-1 תאים חיוביים באמצעות וקטור Rev-מותנה lentiviral מבטא את חלבון פלואורסצנטי ירוק

שבב microfluidic תרמופלסטיים משולב פותח לשימוש כאבחון מולקולרי. השבב מבצע חילוץ חומצות גרעין, transcriptase ההפוכה, וה-PCR. שיטות לבודה והפעלת השבב מתוארות.

ייצור שבבים microfluidic ושיטה לגילוי שפעת

במאמר זה אנו מציגים שבב microfluidic לניתוח תא בודד. זה מאפשר כימות של חלבונים תאיים, אנזימים, cofactors, ושליחים שני באמצעות מבחני או immunoassays ניאון.

שבב microfluidic לניתוח הכימי תכליתי של תאים בודדים

פרוטוקול זה מתאר את השיטות לבניית מודל עכבר מח עצם/כבד/תימוס אנושי עם חסינות מהונדסת מבוססת תאי גזע נגד זיהום HIV.

תאי גזע מהונדסים חסינות בהתבסס נגד HIV זיהום במודל העכבר האנושי

תיאר מתודולוגיה quantitate את הביטוי של גנים 96, 18 פני שטח חלבונים על ידי תאים בודדים לשעבר vivo, המאפשרות הזיהוי באופן שונה באה לידי ביטוי גנים, חלבונים בתאים הנגועים בנגיף ביחס תאים נגוע. אנו מיישמים את הגישה ללימוד CD4 הנגועים סיב+ T תאים מבודד קופי מקוק רזוס.

תא בודד כימות של mRNA וביטוי חלבונים השטח ב- CD4 הנגועים בנגיף+ T תאים מבודדים מן קופי מקוק רזוס

אנו מתארים וזמינותו מבוססת תא לדווח על HIV-1 היתוך באמצעות הביטוי של חלבון פלואורסצנטי ירוק לזיהוי על ידי מיקרוסקופ לזרום cytometry או קרינה פלואורסצנטית. זה יכול לשמש כדי לבדוק את מעכבי נגיפי כניסה (במיוחד בשלב fusion) במערכות זיהום תא ולתא.

Cre-עצלן תפוקה גבוהה מופעל ממברנה ויראלי Assay פיוז'ן לזהות מעכבי של היתוך ממברנה נגיפי HIV-1

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שבו תאים בודדים מנוטרים לאירועים חריפים וזיהום HIV-1 פרודוקטיבי במכשיר ננופלואידי. נתוני דימות מגדירים אינטראקציות של קולטן מארח וירוסים ודינמיקה של מסלולי איתות. זוהי השיטה הראשונה עבור תרבות תא יחיד אורך תפוקה גבוהה ננופלואידית והדמיה ללמוד קינטיקה איתות ואינטראקציות מולקולריות.

אפיון תא יחיד של זרם סידן וזיהום HIV-1 באמצעות פלטפורמה אופטופלוידית רב-מפרקית

השבב המיקרופלואידי הקליני הוא טכניקת ניתוח ביו-רפואית חשובה המפשטת עיבוד מקדים של דגימות דם קליניות של מטופלים ומכתימה באופן אימונופלואורסצנטי תאי גידול במחזור הדם (CTCs) באתרם על השבב, ומאפשרת זיהוי וזיהוי מהירים של CTC יחיד.

פלטפורמת שבבים מיקרופלואידית קלינית לבידוד תאי גידול רב-תכליתיים במחזור הדם

תאי גידול במחזור (CTC) הם קריטיים לחקר התקדמות הסרטן והגרורות. מאמר זה מציג פרוטוקול משולב בעל תפוקה גבוהה להעשרת CTC וריצוף CTC יחיד, המשפר את יעילות הלכידה וטוהר ה-CTC תוך הפחתת עלויות הזיהום והריצוף, ובכך מקדם מחקר אונקולוגי מדויק ויישומים קליניים.

טכנולוגיית מיון תאי גידול במחזור וריצוף תאים בודדים מבוססת מיקרופלואידיקה

למד ללכוד לימפוציטי T עוזרים חיוביים ל-CD4 מדגימות דם באמצעות מכשיר מיקרו-נוזלי מבוסס PDMS. שיטה זו מאפשרת ניתוח תאים מדויק בסביבות עם משאבים מוגבלים למחקר אימונולוגי ואבחון HIV.

CD4 + T-לימפוציטים לכידת באמצעות שבב Microfluidic פנויה ל-HIV

גלה סרטונים נוספים