Name: Multiparametric מיפוי אופטי של הלב Langendorff-perfused הארנב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: למד מיפוי אופטי רב-פרמטרי בלב ארנב מושרה Langendorff לחקר אלקטרופיזיולוגיה לבבית. שיטה זו מאפשרת תיעוד סימולטני של פוטנציאלי פעולה וסידן לניתוח הפרעות קצב ותפקוד לבבי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH R01 HL085369 מענקים, HL067322, HL082729, EB008999

1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן טרי פתרון Tyrodes 'עשה (ב מ"מ, 128.2 NaCl, 1.3 CaCl 2, 4.7 KCl, 1.19 לאא 2 PO 4, 1.05 MgCl 2, 20.0 NaHCO 3, ו - 11.1 גלוקוז). כדי לזרז את הכנת יומי של פתרונות, שני פתרונות להכין מלאי מראש ולאחסן אותם במקרר 4 ° C: (1) במלאי אני (ב g/2L, 374.6 NaCl, 9.56 CaCl 2, 17.52 KCl, 8.21 לאא 2 PO 4 , 10.67 MgCl 2) ו (2) מלאי II (ב g/2L, 84.01 NaHCO 3). כדי להפוך את 2L של פתרון מספיק עבור ניסוי אחד לקחת "Tyrodes 1840mL מים לערבב deionized ובו 80mL של צילומים אני, 80mL של מלאי השנייה, 4 גרם של גלוקוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו פתרונות המניות של צבעים uncouplers: (1) עירור-התכווצות blebbistatin uncoupler מניות פתרון (Tocris פתרון Bioscience, 2mg/mL ב DMSO); (2) מתח רגיש לצבוע di-4-ANEPPS פתרון מניות (Invitrogen, 1mg/mL פתרון DMSO) (3) מתח רגיש לצבוע RH 237 מניות פתרון (Invitrogen, פתרון 1.25mg/ml ב DMSO); (4) אינדיקטור סידן Rhod, 02:00 פתרון מניות (Invitrogen, פתרון 1mg/ml ב DMSO). ניסוי ארנב בודד דורש כ 30 μL של פתרון di-4-ANEPPS המניות, 30 μL של פתרון RH237 המניות, ו 200 μL של הפתרון Rhod 02:00 מניות. כדי למנוע קפיאה חוזרות הפשרה, אנו מאחסנים 100 aliquots μL של di-4-ANEPPS ב -20 ° C. צבעים אחרים מאוחסנים גם ב -20 ° C. חנות blebbistatin מומס במקרר 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הקציר, הלב פתרון Tyrodes "להעביר לבקבוק 2L ולמקם אותו לתוך אמבט מים (פישר סיינטיפיק) אשר שומרת על הטמפרטורה פתרון ב 37 ° C. הפתרון הוא מחומצן עם 95% O 2 - 5% CO 2. PH נשמר 7.35 ± 0.05 על ידי התאמת רמת חמצון. הפתרון הוא הופץ במערכת זלוף Langendorff ו מסוננים לפי מסנן רשת ניילון (גודל הנקבוביות: 11μm, Millipore) ממוקם בקו זלוף לפני צינורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו ציוד ניטור לפני קצירת הלב. מתמר לחץ (WPI) משמש כדי לפקח על הלחץ אבי העורקים במהלך הניסוי. Baseline של מתמר הלחץ מותאם אפס מ"מ כספית כאשר הלב אינו מחובר למערכת זלוף. פסיאודו א.ק.ג. אלקטרודות ממוקמות בחדר עופרת משוער I, II ו-III של המשולש Einthoven אק"ג. </li></ol> 2. קציר זלוף הלבבות הארנב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן ארנב עוצר הארנב. להרדים את הארנב על ידי הזרקה תוך ורידית של הפרין pentobarbital נתרן (50 מ"ג / ק"ג) עם U 2000. כאשר הארנב מורדמים לגמרי, אשר נקבע על ידי היעדר רפלקס הכאב, חלל בית החזה נפתח במהירות את הלב והריאות הן נכרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך בקצה העליון של האאורטה עולה לפני כל הסניפים של קשת אבי העורקים. רוקן את האוויר מן האאורטה עולה ולאחר מכן במהירות cannulate את הלב 16-מד הצינורית, אשר חובר בעבר הצייד בועה כי חשוב מאוד לשמור על האוויר של התקפי לב. לאחר הלב perfused retrogradely במערכת Langendorff הלא הסירקולציה המחודשת זלוף, לעשות חתך כדי לפתוח את קרום הלב במהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הריאות, קנה הנשימה, שומן, רקמות החיבור, ואילו דם הוא הסמיק על ידי זלוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשוב מאוד! צינורות סיליקון (~ ארוך 3 ס"מ, ו - 2 מ"מ בקוטר) מוחדר דרך וריד ריאתי שסתום צניפי לתוך החדר השמאלי (LV) והמשיך שם לאורך הניסוי. צינור זה משחרר את הפתרון כי הוא לכוד בתוך LV. ללא מחזור במשך שעות במהלך הניסוי Langedorff-זלוף בלב משותקת מכנית, היא עלולה לגרום איסכמיה קשה בחלל LV כדי לייצר הפרעות קצב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את הלב עם צינורית למערכת Langendorff-זלוף הסירקולציה המחודשת עם מנגנון מיפוי אופטי. </li></ol> 3. ביצוע ניסויים באמצעות מערכת מיפוי אופטי פנורמי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הלב בתא מחוייט משושה ולחבר את הצינורית למערכת זלוף. שמור את הלחץ על העורקים 60 ± 5 מ"מ כספית על ידי התאמת קצב הזרימה של המשאבה זלוף. צג להוביל אני פסאודו אק"ג. שמירה על pH בסביבות 7.35 ± 0.05. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את האור בחדר, כי הוא blebbistatin photoinactivated עד סוף UV נמוכה (450-490 ננומטר) 17 של החלק הנראה של הספקטרום. לאט לאט להזריק פתרון מניות blebbistatin דרך נמל הזרקת הצייד אוויר הבועה הממוקם מעל הצינורית. לאט לאט להזריק blebbistatin 0.1ml להזרקה כל בולוס. חכו הלחץ לייצב לפני הזריקה הבאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות במקום אלקטרודה צעדה על מיקום ספציפי עיצוב ניסיוני שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוקוס את התמונה של הלב בזכוכית חלבית הממוקמת המטוס תמונה של מערך צילום דיודה כל (PDA) משלושהמחולקת באופן שווה זוויות המקיפים את הלב. התאם את המיקום של הצינורית ואת המרחקים בין מחשב כף יד כל הלב, כדי להתאים את הלב את התצוגה של השדה של כל שלושת מחשבי כף יד. קח תמונה של כל תמונה ממוקדת הזכוכית החלבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק 10 ~ 20μL di-4-ANEPPS פתרון מניות דרך נמל הזרקת במלכודת אוויר לתוך הבועה הפתרון זלוף. חכו 1 ~ 3 דקות לפני נטילת הקלטות אופטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הקלטת הראשונה, להפוך את הנורית הירוקה (ללא פילטר עירור, LED המבול, Lumileds) על, לקחת הקלטות אופטיים בו זמנית שלושה מחשבי כף יד הקשורים למערכת נתונים מחוייט הרכישה, 5 ו לכבות את הנורית. בדוק את איכות אותות מן פיקסלים שונים של כל שלושת מחשבי כף יד. הוסף 0.1 ~ 0.2mL מניות פתרון blebbistatin אם ממצא תנועה בתוך פוטנציאל הפעולה האופטיים הם לב. הוסף עוד 5 פתרון μL di-4-ANEPPS המניות אם אות לרעש יחס נמוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיום פרוטוקול הניסוי נועד למחקר פונקציונלי. Re-להכתים את הלב עם פתרון מניות נוספות di-4-ANEPPS 5μL אם האות מידרדר במהלך הניסויים בשל photobleaching או כשלון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את האור בחדר לאחר השלמת המחקר תפקודית. צלמו תמונות של הלב מ -36 זוויות מחולקת באופן שווה. זו מושגת על ידי החלפה של לב על כל צעד של ° 10 עם מצלמה דיגיטלית קבוע במיקום של כף יד אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את הלב מתוך החדר. מסננים את כל הפתרונות. לשטוף את מערכת זלוף ברצף של די מים, אלכוהול מגיב 70%, ושוב מים DI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח הנתונים כולל שחזור של הגיאומטריה הלב מן 36 צילומים דיגיטליים, רישום של האות האופטי על פני השטח של הגיאומטריה המשוחזר, וכימות משך פוטנציאל פעולה (APD), מהירות ההולכה (CV), שלב וכו '6 </li></ol> 4. ביצוע ניסויים באמצעות מערכת מיפוי כפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (המשך אחרי חלק 2) מניחים את הלב cannulated בתא זכוכית (רדנוטי) ולחבר את הצינורית למערכת זלוף. הצמד את הלב לתחתית סיליקון של החדר בבית חדרית הקודקוד ואת הפרוזדורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את האור בחדר. לאט לאט להזריק פתרון מניות blebbistatin (15 ~ 20 דקות להגיע 10μM) דרך יציאת זריקה לפני קנית זלוף לשתק את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים צלחת פטרי מפלסטיק, או כיסוי אחר חלון זכוכית, מעל פני השטח epicardial כדי להפחית את התנועה של פני השטח את הפתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוקוס שתי מצלמות CMOS במערכת מיפוי כפול (Ultima-L, SciMedia) בשדה באותו מבט. הקרינה הנפלטת מופרד באמצעות מראה dichroic (635nm החיתוך, אומגה אופטי), ו מסוננים לפי longpass מסנן 700nm (Thorlabs) עבור אותות מתח על ידי bandpass 590/30 ננומטר המסנן (אומגה אופטי) עבור אותות סידן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מטרת המדריכים לאור שתי מנורות הלוגן (Newport אוריאל מכשירים, סטרטפורד, CT, SciMedia, בקוסטה מסה, קליפורניה) לכיוון שדה ומיפוי של נוף להשיג אפילו תאורה. מסננים עירור (531/40 ננומטר, SemRock) משמשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכתם הלב עם הפתרון מתח רגיש לצבוע 237 מניות RH (10 ~ 30 μL) דרך יציאת ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את Rhod, 02:00 (0.2mL) פתרון מניות עם Pluronic F-127 (Invitrogen, 01:01 תערובת). Sonicate עבור 1min ב sonicator מים באמבטיה. להזריק את התערובת דרך נמל הצייד של בועה. המתן כ 20 דקות כדי לאפשר את דה esterification של Rhod-02:00 לפני תחילת המיפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקלטת אחד, לכבות את משאבת superfusion כדי למנוע תנועה על פני השטח של הפתרון: להפעיל עירור מקור אור (מנורות הלוגן); לקחת הקלטות אופטי באמצעות שתי מצלמות מחובר למערכת רכישת נתונים (Ultima-L, SciMedia) , לכבות את האור עירור, ולהדליק את המשאבה superfusion. בדוק את האיכות של אותות אופטיים. מחדש את רקמת הכתם במידת הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיום שאר פרוטוקול הניסוי מיועד למחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את האור בחדר וגם לצלם הלב המכיל את שדה הראיה. קח את הלב מתוך החדר. מסננים את כל הפתרונות. לשטוף את מערכת זלוף ברצף של די מים, אלכוהול מגיב 70% (פישר סיינטיפיק), ומים DI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח הנתונים כולל מדידות של APD, קורות חיים, משך סידן חולף (CaTD), העיכוב בין upstroke AP ועליית חתול, זמן עלייה של סידן החולף, וזמן מתמיד של התאמה monoexponential של ריקבון החתול. </li></ol> נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/3160/3160fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. תוצאות הניסוי נציג Langendorff-perfused ארנב באמצעות מערכת מיפוי אופטי פנורמי. (א) להציג הקדמי של הלב שפן ואת הגיאומטריה משוחזר לב ארנב בצורת משטח רשת, רשת תלת מימדי. (ב) Tהוא הסיר משטח epicardial בצבעים ידי השלב (המתקבלים מתוך ניתוח השלב מטוס 18) המציין את Wavefront באדום במהלך אפיזודה של tachyarrhythmia. (ג) פוטנציאל אופטי פעולה הקלטות מחמישה מיקומים ברחבי הייחודיות השלב התאפיינה 1-5 בלוח ב (ד) שמונה תמונות של Wavefront ההפעלה (צבע אדום) התפשטות במהלך מחזור של הפרעות קצב ההולך ושב יציב. חוגים Wavefront בכיוון השעון סביב הייחודיות שלב, הגלוי על פני השטח הקדמי של הלב. הצבע עבור repolarization (כחול) מוגדרת להיות שקוף חלקית כך Wavefront האחורי גלוי (למשל, על 80ms, 100ms, 120ms ו). הסרט של הפרעת קצב זו ההולך ושב מסופק וידאו משלים 1. השיטות לשחזור הגיאומטריה, רישום סימן, החישוב של המפה שלב, ואת הסרת פני השטח מתוארות פרטים במקום אחר 6. <img src="/files/ftp_upload/3160/3160fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. תוצאות נציגת ניסוי Langendorff-perfused ארנב לב באמצעות מערכת מיפוי כפול (מיפוי סימולטני של פוטנציאל פעולה וסידן חולף). (א) המשטח הקדמי של הלב עם השדה מיפוי מבט מכוסה על ידי נקודות שחורות. (ב) להציג תקריב של הקלטות מאתר אחד. (ג) עקבות מדגם של פוטנציאל פעולה (כחול) וסידן חולף (אדום) של מערך של מיקומים מחולקת באופן שווה מסומן על ידי נקודות שחורות ב הערה א הפאנל כי לא כל ההקלטות פיקסל מוצגים ואת ברזולוציה מרחבית היא 200μm.

<ol><li>Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of the heart.</a> Circ Res. 95, 21-33 (2004).</li>
<li>Panfilov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+heart+size+a+factor+in+ventricular+fibrillation%3F+Or+how+close+are+rabbit+and+human+hearts%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Is heart size a factor in ventricular fibrillation? Or how close are rabbit and human hearts?</a> Heart Rhythm. 3, 862-864 (2006).</li>
<li>Maier, L. S., Bers, D. M., Pieske, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+Ca%282%2B%29-handling+and+sarcoplasmic+reticulum+Ca%282%2B%29-content+in+isolated+rat+and+rabbit+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differences in Ca(2+)-handling and sarcoplasmic reticulum Ca(2+)-content in isolated rat and rabbit myocardium.</a> J Mol Cell Cardiol. 32, 2249-2258 (2000).</li>
<li>Bray, M. A., Lin, S. F., Wikswo, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+surface+reconstruction+and+fluorescent+visualization+of+cardiac+activation%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional surface reconstruction and fluorescent visualization of cardiac activation.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 47, 1382-1391 (2000).</li>
<li>Qu, F., Ripplinger, C. M., Nikolski, V. P., Grimm, C., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+panoramic+imaging+of+cardiac+arrhythmias+in+rabbit+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional panoramic imaging of cardiac arrhythmias in rabbit heart.</a> J Biomed Opt. 12, 044019-044019 (2007).</li>
<li>Lou, Q., Ripplinger, C. M., Bayly, P. V., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+panoramic+imaging+of+epicardial+electrical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Quantitative panoramic imaging of epicardial electrical activity.</a> Ann Biomed Eng. 36, 1649-1658 (2008).</li>
<li>Kay, M. W., Amison, P. M., Rogers, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+surface+reconstruction+and+panoramic+optical+mapping+of+large+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional surface reconstruction and panoramic optical mapping of large hearts.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 51, 1219-1229 (2004).</li>
<li>Li, W., Ripplinger, C. M., Lou, Q., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+monophasic+shocks+improve+electrotherapy+of+ventricular+tachycardia+in+a+rabbit+model+of+chronic+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Multiple monophasic shocks improve electrotherapy of ventricular tachycardia in a rabbit model of chronic infarction.</a> Heart Rhythm. 6, 1020-1027 (2009).</li>
<li>Ripplinger, C. M., Lou, Q., Li, W., Hadley, J., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Panoramic+imaging+reveals+basic+mechanisms+of+induction+and+termination+of+ventricular+tachycardia+in+rabbit+heart+with+chronic+infarction%3A+implications+for+low-voltage+cardioversion%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Panoramic imaging reveals basic mechanisms of induction and termination of ventricular tachycardia in rabbit heart with chronic infarction: implications for low-voltage cardioversion.</a> Heart Rhythm. 6, 87-97 (2009).</li>
<li>Efimov, I. R., Rendt, J. M., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+maps+of+intracellular+%5BCa2%2B%5Di+transients+and+action-potentials+from+the+surface+of+perfused+guinea-pig+hearts+%28abstract%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Optical maps of intracellular [Ca2+]i transients and action-potentials from the surface of perfused guinea-pig hearts (abstract).</a> Circulation. 90, 632-632 (1994).</li>
<li>Choi, B. R., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+maps+of+optical+action+potentials+and+calcium+transients+in+guinea-pig+hearts%3A+mechanisms+underlying+concordant+alternans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous maps of optical action potentials and calcium transients in guinea-pig hearts: mechanisms underlying concordant alternans.</a> J Physiol. 529, 171-188 (2000).</li>
<li>Fast, V. G., Ideker, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+optical+mapping+of+transmembrane+potential+and+intracellular+calcium+in+myocyte+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Electrophysiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous optical mapping of transmembrane potential and intracellular calcium in myocyte cultures.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 11, 547-556 (2000).</li>
<li>Laurita, K. R., Singal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+action+potentials+and+calcium+transients+simultaneously+from+the+intact+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mapping action potentials and calcium transients simultaneously from the intact heart.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 280, 2053-2060 (2001).</li>
<li>Choi, B. R., Burton, F., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytosolic+Ca2%2B+triggers+early+afterdepolarizations+and+Torsade+de+Pointes+in+rabbit+hearts+with+type+2+long+QT+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cytosolic Ca2+ triggers early afterdepolarizations and Torsade de Pointes in rabbit hearts with type 2 long QT syndrome.</a> J Physiol. 543, 615-631 (2002).</li>
<li>Hwang, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+calcium+and+vulnerability+to+fibrillation+and+defibrillation+in+Langendorff-perfused+rabbit+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Intracellular calcium and vulnerability to fibrillation and defibrillation in Langendorff-perfused rabbit ventricles.</a> Circulation. 114, 2595-2603 (2006).</li>
<li>Lou, Q., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+susceptibility+to+alternans+in+a+rabbit+model+of+chronic+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Conf+Proc+IEEE+Eng+Med+Biol+Soc%22%5BJournal%5D)">Enhanced susceptibility to alternans in a rabbit model of chronic myocardial infarction.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 4527-4530 (2009).</li>
<li>Kolega, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxicity+and+photoinactivation+of+blebbistatin+in+UV+and+visible+light%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Phototoxicity and photoinactivation of blebbistatin in UV and visible light.</a> Biochem Biophys Res Commun. 320, 1020-1025 (2004).</li>
<li>Bray, M. A., Wikswo, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+phase+plane+analysis+for+nonstationary+reentrant+cardiac+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+E+Stat+Nonlin+Soft+Matter+Phys%22%5BJournal%5D)">Considerations in phase plane analysis for nonstationary reentrant cardiac behavior.</a> Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys. 65, 051902-05 (2002).</li>
<li>Fast, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recording+action+potentials+using+voltage-sensitive+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Practical+methods+in+cardiovascular+research%22%5BJournal%5D)">Recording action potentials using voltage-sensitive dyes.</a> Practical methods in cardiovascular research. , 233-255 (2005).</li>
<li>Knisley, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmembrane+voltage+changes+during+unipolar+stimulation+of+rabbit+ventricle%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Transmembrane voltage changes during unipolar stimulation of rabbit ventricle.</a> Circ Res. 77, 1229-1239 (1995).</li>
<li>Bishop, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+photon+scattering+in+optical+signal+distortion+during+arrhythmia+and+defibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">The role of photon scattering in optical signal distortion during arrhythmia and defibrillation.</a> Biophys J. 93, 3714-3726 (2007).</li>
<li>Efimov, I. R., Fedorov, V. V., Joung, B., Lin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+cardiac+pacemaker+circuits%3A+methodological+puzzles+of+the+sinoatrial+node+optical+mapping%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Mapping cardiac pacemaker circuits: methodological puzzles of the sinoatrial node optical mapping.</a> Circ Res. 106, 255-271 (2010).</li>
<li>Fedorov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+blebbistatin+as+an+excitation-contraction+uncoupler+for+electrophysiologic+study+of+rat+and+rabbit+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts.</a> Heart Rhythm. 4, 619-626 (2007).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

בהתבסס על הניסיון שלנו, את המפתחות על ניסוי מוצלח לב Langendorff-perfused ארנב כוללים פתרון מוכן היטב &quot;Tyrodes, הקציר מהירה של הלב, מתוחזק היטב בלחץ זלוף, ו-pH מתאים הפתרון מחומצן במערכת זלוף. כדי להקליט את האות עם היחס הגבוה ביותר אות לרעש אפשרי, אנחנו צריכים לשקול גורמים שונים, לרבות מקור אור, מסננים אופטיים, תוך התמקדות אופטיקה, photodetectors, וכו &#39;19. פרטים על היבטים אלה הם דנו במקום אחר 19. ארנבים צעירים (גיל: 4-5 חודשים, משקל: 7-9 ק&quot;ג) יכול לשמש כדי למנוע את השומן epicardial, אשר מקטין את יחס אות לרעש של אותות אופטיים. האות נרשמו על ידי כל פיקסל הוא שילוב משוקלל של האור הנפלט בהיקף של רקמות. עומק נפח רקמה זו תלויה באורכי גל עירור ופליטה של ​​צבע המשמש. עבור di-4-ANEPPS, כדוגמה, את עומק החדירה הוא מוערך 300μm בלב ארנב 20. לכן, הפירוש של האות האופטי צריך להיעשות בזהירות כאשר ההטרוגניות המקומי של הפונקציה חשמל נמצאים sinoatrial הצומת, הצומת החדרים והעליות, ובמהלך הפרעת קצב חדרית 1,21,22. מגבלה אחת של טכניקת מיפוי אופטי לעומת הקלטה אלקטרודה היא כי השלב repolarization של פוטנציאל הפעולה אופטי distored לעתים קרובות על ידי חפץ תנועה נגרמת על ידי התכווצות הלב. אילוץ מכני יכול לשמש כדי להפחית את החפץ, אך לא ניתן לבטל לחלוטין את זה. לשם השוואה, פרמקולוגיות, עירור והתכווצות uncouplers יעילים בהסרת חפץ בתנועה. עם זאת, אלה uncouplers (למשל 2,3-Butanedione Monoxime) יכול להיות משמעותי תופעות לוואי אלקטרו. Blebbistatin הודגם כי אין תופעות לוואי על electrophysiology הלב בלב נורמלי 23, ובכך הוא מבטיח uncoupler למיפוי אופטי. יצוין כי את התאוצה של בצקת עקב ביטול של התכווצות יכול להשפיע גם על electrophysiology.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> S271-1 </td></tr><tr><td> CaCl 2 (2H 2 O) </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> C79-500 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> S217-500 </td></tr><tr><td> MgCl 2 (6 שעות 2 O) </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> M33-500 </td></tr><tr><td> לאא 2 PO 4 (H 2 O) </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> S369-500 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> S233-3 </td></tr><tr><td> D-גלוקוז </td><td> פישר סיינטיפיק, הדשא הוגן, ניו ג&#39;רזי </td><td> D16-1 </td></tr><tr><td> Blebbistatin </td><td> Tocris Bioscience, Ellisville, MO </td><td> 1760 </td></tr><tr><td> Di-4-ANEPPS </td><td> Invitrogen, בקרלסבד, קליפורניה </td><td> D1199 </td></tr><tr><td> RH237 </td><td> Invitrogen, בקרלסבד, קליפורניה </td><td> S1109 </td></tr><tr><td> Rhod, 02:00 </td><td> Invitrogen, בקרלסבד, קליפורניה </td><td> R1244 </td></tr><tr><td> Pluronic F127 </td><td> Invitrogen, בקרלסבד, קליפורניה </td><td> P3000MP </td></tr><tr><td> Sulphoxide דימתיל (DMSO) </td><td> סיגמא, סנט לואיס, מיזורי </td><td> D2650 </td></tr></tbody></table>

multiparametric מיפוי אופטי של הלב langendorff-perfused הארנב

Multiparametric Optical Mapping of the Langendorff-perfused Rabbit Heart

דימות אופטי בדיקות ניאון יש שיטות מחקר מתקדמות באופן משמעותי בתחום electrophysiology לב בדרכים לא יכול היה להיות מושלם על ידי גישות אחרות 1. עם השימוש של צבעים סידן מתח רגיש, מיפוי אופטי המאפשר מדידת פוטנציאל פעולה הטרנסממברני ו הארעיים סידן עם רזולוציה מרחבית גבוהה ללא מגע פיזי עם הרקמה. זה עושה מדידות של הפעילות החשמלית לב אפשרי בתנאים רבים בהם את השימוש של אלקטרודות לא נוח או אפשרי 1. לדוגמה, הקלטות אופטי לספק שינויים מורפולוגיים מדויק של פוטנציאל הממברנה במהלך ומיד לאחר הגירוי דפיברילציה, בעוד טכניקות אלקטרודה קונבנציונאלי סובלים מגירוי-Induced חפצים במהלך ואחרי גירויים בגלל הקיטוב אלקטרודה 1. הלב Langendorff-perfused הארנב הוא אחד הדגמים למד רוב פיזיולוגיה פתופיזיולוגיה הלב האנושי. סוגים רבים של הפרעות קצב שנצפו קלינית יכול להיות סיכם במודל לב שפן. זה היה הראו כי תבניות גל בלב ארנב במהלך הפרעות קצב הלב, נקבעת על ידי גודל אפקטיבי של הלב ואת אורך הגל של החזרה, דומים מאוד כי 2 לב האדם. זה היה הראו גם כי היבטים קריטיים של התכווצות, עירור (EC) צימוד ארנב שריר הלב, כגון התרומה היחסית של reticulum sarcoplasmic (SR), דומה מאוד צימוד EC האדם 3. כאן אנו מציגים את הנהלים הבסיסיים של ניסויים מיפוי אופטי Langendorff-perfused לבבות ארנב, לרבות התקנת המערכת זלוף Langendorff, הגדרת מערכות אופטיות המיפוי, בידוד cannulation של זלוף הלב, צבען צביעה של התכווצות, עירור, לב קשירה והתרה, וכן אוסף של אותות אופטיים. שיטות אלה יכול להיות מיושם גם ללב ממינים אחרים מאשר ארנב עם התאמות ספיקות, אופטיקה, פתרונות וכו &#39; שתי מערכות מיפוי אופטי מתוארים. מערכת מיפוי פנורמי משמש כדי למפות את epicardium כל הלב ארנב 4-7. מערכת זו מספקת מבט גלובלי של האבולוציה של מעגלים ההולך ושב במהלך arrhythmogenesis ו דפיברילציה, נעשה שימוש כדי לחקור את המנגנונים של הפרעות קצב ו antiarrhythmia טיפול 8,9. מערכת מיפוי כפול משמש כדי למפות את פוטנציאל הפעולה (AP) וסידן חולף (CAT) בו זמנית באותו שדה הראייה 10-13. גישה זו שיפרה את ההבנה שלנו של התפקיד החשוב של הסידן alternans חשמל הגיוס של הפרעות קצב 14-16.

מאמר זה מתאר את ההליכים הבסיסיים לעריכת ניסויים מיפוי אופטי בלב Langendorff-perfused הארנב באמצעות מערכת הדמיה פנורמית, ואת שיטת כפול (מתח סידן) הדמיה.

Multiparametric מיפוי אופטי של הלב Langendorff-perfused הארנב

דימות אופטי וחומרי בדיקה פלואורסצנטיים קידמו באופן משמעותי את מתודולוגיית המחקר בתחום האלקטרופיזיולוגיה של הלב בדרכים שלא היו אפשריות...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לחקור תכונות אלקטרופיזיולוגיות של הלב, כגון הולכה, רפולריזציה, אריתמוגנזה וניהול סידן, באמצעות טכניקות של מיפוי אופטי בלב ארנב בפרפוזיה בשיטת langor. מטרה זו מושגת תחילה על ידי בידוד וביצוע פרפוזיה רטרוגרדית של לב ארנב שלם דרך האאורטה. השלב הבא של הפרוצדורה הוא חשיפת פני השטח של הלב, השבתה של התכווצויות הלב באמצעות חסמי ערוצי סידן (excitation contraction on Coler BLEs statin), וצביעה נכונה של המיוקרדיום באמצעות אינדיקטורים פלואורסצנטיים רגישים למתח ולסידן.לאחר מכן, מבוצעות הקלטות של פוטנציאלי פעולה אופטיים ממרבית האפיקרדיום של הפרונטריקולר באמצעות מערכת מיפוי אופטית פנורמית. אותות אופטיים ממופים לאחר מכן על גיאומטריית תלת-ממד ששוחזרה של פני השטח של האפיקרדיום של הלב. במהלך שלב זה, ניתן להקליט בו-זמנית את פוטנציאל הפעולה האופטי ואת הטרנזיינט של הסידן באמצעות מערכת דימוי כפולה שאינה פנורמית.נוהל זה מספק נתונים כמותיים של השריר הלבבי במרחב ובזמן, של העירור והרפולריזציה, וכן מאפיינים תואמים של ויסות הסידן, אותם ניתן לנתח במהלך קצב רגיל וכן במצבים של אריתמיה בעלייה ובחדר. שלום, שמי ד"ר Iger Eov. אני פרופסור להנדסה ביו-רפואית באוניברסיטת Washington ב-St.Louis.הטכניקה האופטית שאנו מציגים היום היא טכנולוגיה ייחודית בעלת מספר יתרונות על פני מיקרו-אלקטרוגרמות מסורתיות, שכן היא מסוגלת להקליט עשרות ואלפי פוטנציאלי פעולה ותופעות לוואי של סידן (calcium transients) בו-זמנית. יתרה מכך, טכנולוגיה זו חסינה מפני ארטיפקטים הנובעים מגירוי חשמלי ומדפיברילציה, אשר מעוותים באופן משמעותי פוטנציאלי פעולה המוקלטים בכל אלקטרוגרמה. בנוסף, תופעות לוואי של סידן ניתנות להקלטה באמצעות טכניקה זו בלבד.אין פשוט חלופה אחרת. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום האלקטרופיזיולוגיה של הלב, כגון מנגנוני ההשראה, התחזוקה והסיום של הפרעות קצב עליותיות ובטניות המסכנות חיים, כמו גם מידול תפקוד ההולכה, העירור והצימוד בין העירור לכיווץ במחלות כגון מחלות לב מולדות, מחלות מטבוליות ואי-ספיקת לב. לאחר ההכנה לניתוח, יש להקלי את הארנב באמצעות תערובת של sodium pentobarbital ו-heparin.ברגע שהארנב אינו מגיב עוד לרפלקס כאב, פתח את בית החזה והוצא את הלב והריאות. בצע חתך בקצה העליון של האביון העולה (ascending aorta), לפני כל ענפי קשת האביון, והפעל את המשאבה כדי להתחיל את זרימת תמיסת ה-Tyro במערכת הפרפוזיית LRF ללא סירקולציה. חבר במהירות את הלב לקנולת אביון במידה 16 המחוברת למערכת הפרפוזיית LOR.רוקנו את האוויר מהאאורטה וקשרו את קנולת האאורטה לאחר ביצוע פרפוזיה מלאה. פתחו מיד את פרוקרדיום. לאחר מכן, הסירו את רקמת השומן של הריאות והטרכאה המקיפה את הלב ואת רקמות החיבור.חשוב מאוד למנוע הצטברות של נוזלים בחדר השמאלי, דבר שעלול לגרום לאיסכמיה. לכן, הכניסו צינור ניקוז מסליקון דרך וריד ריאתי ודרך המסתם המיטרלי אל תוך החדר השמאלי. כעת, העבירו את הלב עם הקנולה למערכת הפרפוזיה Langendorff עם סירקולציה, המצוידת במערכת מיפוי אופטי.הניחו את הלב בתא משושה בהתאמה אישית וחברו את הקנולה למערכת הפרפוזיה. נטרו את הלחץ האורטלי באמצעות מתמר לחץ ושמרו עליו ברמה של כ-60 פלוס או מינוס 5 millimeters of mercury על ידי כיוונון קצב הזרימה של משאבת הפרפוזיה. שמרו על ה-pH סביב 7.35 פלוס או מינוס 0.05.כבו את תאורת החדר והזריקו לאט את תמיסת המלאי של ה-BLEs statin הרגישה לאור דרך פתח ההזרקה במלכודת בועות האוויר הממוקמת מעל לקנולה. כדי להגיע לריכוז של 10 micromolar של BLEs statin, הזריקו לאט 0.1 milliliters של BLEs statin. לאחר כל הזרקת בולוס, המתינו להתייצבות הלחץ לפני ההזרקה הבאה.מקמו את מערכי הפוטודיודות או ה-PDAs בשלוש זוויות במרווחים שווים סביב הלב. לאחר מכן, בכל PDA, התאימו את מיקוד תמונת הלב על הזכוכית החלבית של מישור התמונה. כווננו את מיקום הקנולה בתא המשושה ואת כל PDA עד שהלב ייכנס לשדה הראייה של שלושת ה-PDAs.לאחר מכן, צלם כל תמונה ממוקדת על הזכוכית המט. הזרק באיטיות 10 עד 20 µL של תמיסת מלאי D four Anep לתוך תמיסת הפרפוזיה דרך פתח ההזרקה במלכודת בועות האוויר. המתן שלוש דקות.בשלב הבא, הניחו בעדינות את אלקטרודת הקוצב במיקום הרצוי. במקרה זה, היא מונחת במרכז המבט הקדמי של הלב. התחילו בביצוע הקלטה אופטית סימולטנית מה-PDAs.וודאו שאין ארטיפקטים של תנועה באות האופטי ושיחס הסיגנל לרעש מספיק לצורך ניתוח נתונים עוקב. עם הסיום, הדליקו את אורות החדר ובצעו תיעוד צילומי של הלב על ידי צילום תמונה אחת עבור כל 10 מעלות של סיבוב ממצלמה הממוקמת במיקום של אחד ה-PDAs. לאחר מכן, עברו לניקוי מערכת הפרפוזיה.הנח את הלב הקנונלי בתא זכוכית מתאים וחבר את הקנולה למערכת הפרפוזיה. קבע את הלב לתחתית הסיליקון של התא בנקודת השיא של החדרים ובפרוזדורים. כדי לקבע את הלב, כבה את תאורת החדר והזרק לאט BLEs statin דרך פתח ההזרקה כדי להפחית את תנועת פני השטח של התמיסה.הנח כיסוי זכוכית מעל פני השטח של האפיקרד. חלק זה של הפרוצדורה מבוצע בדרך כלל בחושך, אך כאן הוא מבוצע באור. כדי לשפר את איכות תמונת הווידאו, העבר את מערכת ההדמיה הכפולה מעל הלב.כעת התמקדו בשתי מצלמות ה-CMO באותו שדה ראייה. לאחר מכן, מקמו את מוליכי האור עבור שתי נורות הלוגן עם מסנן עירור. צבעו את הלב על ידי הוספת 10 עד 20 µL של הצבע הרגיש למתח RH 2 37 דרך פתח ההזרקה.לאחר מכן, הוסף 200 µL של road 2:00 AM עם onic F1 27 בתערובת של יחס אחד לאחד דרך פתח מלכודות הבועות. המתן כ-20 דקות כדי לאפשר את ה-DS ification של ה-road 2:00 AM לפני תחילת המיפוי. כעת בצע הקלטת בדיקה.כבה את משאבת הסופר-פוזיה כדי למנוע תנועה על פני השטח של התמיסה. הדלק את נורות ההלוגן ובצע הקלטה אופטית משתי המצלמות. לאחר מכן, כבה את אור העירור.הפעל את משאבת הסופרפוזיה ובדוק את איכות האותות האופטיים. אם האות חלש, צבע מחדש את הלב עם RH 2 37 נוסף ו road 2:00 AM. אם קיימים ארטיפקטים של תנועה, הוסף BLEs statin נוסף כדי להסיר את התנועה. לאחר שכל הדברים תקינים, המשך בניסוי המתוכנן ונקה את המערכת.עם סיום התהליך, נעשה שימוש במערכת המיפוי האופטי הפנורמית כדי להציג מבט קדמי זה של לב ארנב שעבר פרפוזיה בשיטת Lang Endorf. לשם השוואה, שחזור של גאומטריית הלב מציג את אותו מבט קדמי. פני השטח של האפיקרד שניתן להם "פריסה" (unwrapped) המוצגים כאן מקודדים בצבעים לפי פאזה.הלב עבר אירוע של tachy-arrhythmia מחמישה מיקומים סביב הרוטור. הוצגו פוטנציאלי פעולה אופטיים. כאן, באדום, נראה חזית הפעלה המתפשטת במהלך מחזור של reran arrhythmia יציב.חזית הגל מסתובבת עם כיוון השעון סביב סינגולריות פאזה במשטח הקדמי של הלב. הדפולריזציה מוצגת בכחול שקוף כדי לאפשר ויזואליזציה של חזיתות הגל במשטח האחורי. הלב נבדק באמצעות מערכת מיפוי כפולה כדי להראות מיפוי סימולטני של פוטנציאלי פעולה וטרנזיינטים של סידן.תמונה א' במבט מקרוב של הקלטות מאתר אחד מראה שפוטנציאלי פעולה מסומנים בכחול ותנודות סידן מסומנות באדום. מוצג מערך של עקבות לדוגמה ממערך של אתרים במרווחים שווים, כפי שמוצג על ידי הנקודות במבט קדמי זה. נתונים אלו נאספו ברזולוציה אופטית של 200 microns על 200 microns לפיקסל.ההשלכות של הטיפול מרחיבות את טיפול הדפיברילציה עבור הפרעות קצב עליותיות ובטניות, מכיוון שאנו יכולים להדמיאן באופן ישיר את ההשפעה של גירויים חשמליים חזקים במהלך האלקטרו-תרפיה. שום שיטה חלופית אינה מסוגלת לעשות זאת. באמצעות שיטה זו, פיתחנו ותיקפנו טיפול דפילציה חדש, נטול כאב ובמתח נמוך, עבור פרפור פרוזדורים וטכיקרדיה בטנית.

multiparametric-optical-mapping-langendorff-perfused-rabbit

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

מאמר זה מתאר טכניקה גבוהה ברזולוציה של זמן ומרחב התנועה תמונה אופטית פעולה פוטנציאל על פני השטח של Langendorff-perfused הלבבות חולדה באמצעות צבע פוטנציומטרית (di-8-ANEPPS).

מיפוי אופטי של Langendorff-perfused לבבות עכברוש

דוח זה מספק תיאור מפורט של המתודולוגיה ואת התוצאות של מיפוי אופטי סימולטני endocardial ו epicardial של עירור חשמלי של אטריום נותר בשלמותו הלב Langendorff-perfused כבשה במהלך פרפור פרוזדורי למתוח-Induced.

ברזולוציה גבוהה מיפוי אופטי Endocardial ו Epicardial במודל הכבשים של פרפור פרוזדורי למתוח-induced

מאמר זה מפרט את הליך הנתיחה, הגדרת תפקיד, ואת תנאי הניסוי במהלך מיפוי אופטי פוטנציאל הטרנסממברני (VM) וסידן תאיים חולף (CAT) ב Langendorff מבודד בלב שלם perfused העכבר.

מיפוי אופטי של פוטנציאלים פעולה ו הארעית סידן בלב מאוס

בסרטון זה אנו מבצעים זילוח מדרדר לנגנדורף של לב עכבר מבודד. במהלך ההליך, הפעילות הלבבית של הלב נשמרת על ידי ניקוב אותו לאחור עם פתרון זילוח דרך העורקים הכליליים באמצעות צינורית המוחדרת לתוך אבי העורקים העולה. המודל משמש לחקר הפתופיזיולוגיה הלבבית של הלב.

זילוח לב מדרדר לנגנדורף: טכניקת Ex Vivo לניקוב לב עכבר מבודד

מאמר זה מתאר את הפרוטוקול מפורט וציוד הכרחי למיפוי כפול אופטי של (מ 'V) פוטנציאל הטרנסממברני וחופשי רשתית תוך-sarcoplasmic (SR) Ca 2 + בלב ארנב Langendorff-perfused. שיטה זו מאפשרת לתצפית ישירה וכימות של מטר V ו2+ דינמיקת Ca SR בלב שלם.

מיפוי אופטי של Intra-sarcoplasmic reticulum Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; ופוטנציאל הטרנסממברני בלב ארנב Langendorff-perfused

כאן, אנו מציגים פרוטוקול למיפוי אופטי של פעילות חשמלית מן אטריום ימין בעכבר במיוחד צומת סין-פרוזדורים, ברזולוציה גבוהה במרחב ובזמן.

מיפוי אופטי ברזולוציה גבוהה של צומת סין- פרוזדורי העכבר

פרוטוקול זה מתאר הערכת אלקטרופיזיולוגיות אטריה מאתר ניצול מערכת מיפוי אופטי עם הגיאופוליטיות והמרחביות טמפורלית רזולוציה גבוהה, כולל הקלטות כפולה של מתח הממברנה, Ca2 + חולף תחת מתוכנת גירוי דרך קטטר אלקטרודה מיוחדת.

אלקטרופיזיולוגיות להערכת אטריה מאתר עם מיפוי אופטי ברזולוציה גבוהה

כאן אנו מציגים שיטה לשימוש צנתר אופטי פנים-חדר בלבבות מעשה כדי לבצע ספקטרוסקופיה ספיגת על פני קיר הלב. הנתונים שהושגו מספק מידע חזק על מתח החמצן ברקמות, כמו גם ניצול מצע ופוטנציאל הממברנה במקביל עם ביצועים מדדים לב בהכנה זו בכל מקום.

מהצד הפנים-לב-אש קטטר אור עבור ניטור מטבוליזם הסלולר באמצעות בליעה בספיגת העבר של הלבבות המגברים

מטרת מחקר זה הייתה ליצור שיטה לחקירת דינמיקה קרדיולוגית באמצעות מודל בעלי חיים טרנסלבותית. הגישה הניסיונית המתוארת משלבת אופקרדיוגרפיה כפולה בשילוב עם מחקר אלקטרולוגי להערכת פעילות החשמל במודל לב פורצין מבודד, שלם.

אופקרדיוגרפיה ולימודי אלקטרופיזיולוגיה של לשעבר Vivo נגדורף

פרוטוקול זה מציג מיפוי אופטי דו-צבעי של לבבות עכברים המתקבלים מחיות בר וחיות בר המושפעות מטכיקרדיה חדרית פולימורפית קטכולמינרגית, כולל מדידות אלקטרופיזיולוגיות של מתח טרנסממברנה וטרנזיאנטים תוך-תאיים Ca2+ ברזולוציה טמפורלית ומרחבית גבוהה.

מיפוי אופטי של לבבות בצבע כפול מעכברי RyR2R2474S של טכיקרדיה חדרית פולימורפית קטכולמינרגית

למד מיפוי אופטי רב-פרמטרי בלב ארנב מושרה Langendorff לחקר אלקטרופיזיולוגיה לבבית. שיטה זו מאפשרת תיעוד סימולטני של פוטנציאלי פעולה וסידן לניתוח הפרעות קצב ותפקוד לבבי.

Multiparametric מיפוי אופטי של הלב Langendorff-perfused הארנב

גלה סרטונים נוספים