מיקרו-הזרקה סטריאוטקטית של וקטור ויראלי למניפולציה גנטית בסטריאטום גור עכבר

קחו גור עכבר מהונדס גנטית הנושא קלטת STOP עם אגף loxP החוסמת חלבון פלואורסצנטי אדום או ביטוי RFP.

אבטח את הגור על מסגרת סטריאוטקסית בהתאמה אישית וכסה אותו בקרח כדי לשמור על הרדמה.

יש לחטא את הקרקפת ולסמן את הלמבדה כנקודת הייחוס.

יישר את מחט ההזרקה לקואורדינטות סטריאטליות ביחס ללמבדה וניקב את הגולגולת.

משוך את המחט למשטח הגולגולת, ולאחר מכן הכנס אותה לעומק המטרה.

הזרקת הווקטור הנגיפי המעורבב בצבע לסטריאטום בקצב מבוקר. הווקטור מקודד חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים או GFPs ו-Cre recombinase.

משוך את המחט לאט כדי למנוע זרימה חוזרת של התמיסה.

הסר את הגור ואפשר התאוששות.

בתאים סטריאטליים, הנגיף משחרר את הגנום שלו, ומאפשר ביטוי של Cre recombinase ו-GFP. Cre מסיר את קלטת ה-STOP המוקפת ב-loxP, ומפעיל ביטוי RFP.

ביטוי GFP ו-RFP בו זמנית מאשר מניפולציה מוצלחת של גנים.

מקם את הגור עם הכפפה במגש הראש והניח מעט קרח כתוש סביב שרוול הלטקס כדי לשמור על הרדמת ההיפותרמיה. לאחר מכן שפשפו את ראש הגור ב-70% אתנול ואתרו את נקודת הציון של הלמבדה. סמן אותו בטוש. לאחר מכן כוון את קצה המחט אל הלמבדה והגדר את הקואורדינטות הרוחביות הקדמיות, האחוריות והמדיאליות לאפס.

לאחר מכן, בהתייעצות עם אטלס מוח, העבר את זרוע ההזרקה לאתר המטרה. לדוגמה, הסטריאטום של גורי P2 הוא 2.4 מילימטרים קדמיים ללמבדה, 1.0 מילימטרים משני צידי קו האמצע