עיכוב פעילות עצבית ואיתור שלה באמצעות אלקטרופיזיולוגיה בחולדה

התחל עם חולדה מורדמת מאובטחת במסגרת סטריאוטקסית עם גולגולת חשופה.

באמצעות ציוני הדרך האנטומיים, הברגמה והלמבדה, מאתרים את הקוליקולוס העליון, מבנה מוח עמוק האחראי על עיבוד מידע חזותי.

קדחו ליצירת דש עצם, הסירו אותו והחילו חיץ כדי לשמור על לחות המוח החשוף.

מקם מכלול מזרק המורכב ממיקרופיפטה עם אלקטרודה המחוברת למיקרו-מזרק.

המיקרופיפטה מכילה תמיסת נוירוטרנסמיטר מעכב לדיכוי ריגוש עצבי בזמן שהאלקטרודה מתעדת בו זמנית את הפעילות העצבית.

הורד את המזרק לתוך הקוליקולוס העליון וכסה את המשטח החשוף באגר מותך כדי למנוע התייבשות.

האור הנוכחי מהבהב לעין כדי לעורר נוירונים ולעורר פוטנציאל פעולה מסונכרן.

הזריק את המוליך העצבי, שנקשר לקולטנים שלו ומפעיל זרם יוני כלוריד.

זרם זה מבצע היפר-פולריזציה של פוטנציאל הממברנה, ובכך מדכא את פוטנציאל הפעולה.

ככל שריכוז המוליך העצבי יורד עם הזמן, הפעילות העצבית מתאוששת.

כדי להכין את פיפטות הזרקת ההקלטה, ראשית, משוך נימי 7 סנטימטר בקוטר חיצוני של 1 מילימטר. עבור שוטר אנכי דגם 720 או יחידה דומה, הגדר את התנור ל-18 ואת הסולנואיד לאחד. לאחר מכן, לבשו כפפות, שברו ידנית את הקצה כדי ליצור פתח וודאו במיקרוסקופ שהקוטר הפנימי הוא בין 30 ל-40 מיקרומטר. מדוד זאת באמצעות סרגל העינית. הוא יפיק עכבה נמוכה יחסית של 0.3 עד 0.6 מגה-אוהם.

ואז מהקצה הלא מחודד, הכניסו חוט כסף לפיפטה באורך של כ -7 סנטימטרים, והשאירו 1 עד 2 סנטימטרים תלויים מחוץ לפיפטה. כופפו את החוט העודף הזה בצורה אורתוגונלית לנימים. לאחר מכן, קח מחט היפודרמית בגודל 30 ומרח דבק פלסטי גמיש על הפיר. לאחר מכן הכנס לאט את המחט לתוך הפיפטה ככל האפשר.

הוסף עוד דבק ליצירת איטום בצומת בין הפיפטה למחט. כשקצה הפיפטה כלפי מעלה, הניחו למכלול להתייבש כ-12 שעות. לאחר הרדמה והכנסת החולדה למסגרת סטריאוטקסית, יש למרוח משחה עיניים, לגלח את ראשה נקי.

לאחר מריחת הרדמה מקומית ואישור תוכנית כירורגית של הרדמה, המשך בחיתוך הקרקפת לאורך החציון באמצעות להב אזמל מספר 10. זה יחשוף את התפרים העטרתיים והסגיטליים. לאחר מכן, בעזרת מרית כירורגית, זהה את ההפניות האנטומיות של הלמבדה והברגמה.

התאימו את מיקום הראש כך שציוני דרך אלה יהיו מפולסים באותו מישור אופקי. ואז אפס מצביע קשיח דק כמו צינור זכוכית על הברגמה. לאחר מכן, התאם את מיקום הצינור למיקום מעניין באמצעות קואורדינטות מהברגמה.

השתמש ב-Sharpie כדי לצייר ריבוע סביב אזור היעד עבור הגולגולת. כעת, בעזרת המקדחה המעוקרת הכירורגית, הסר לאט את העצם לאורך הסימנים. התחל בשימוש בכמה שפחות לחץ והשאר את המקדחה בתנועה כדי למנוע נזק לרקמות הנגרם על ידי הראש עקב חיכוך.

כאשר העצם נעשתה דקה, הסר בזהירות את החלק המרובע בעזרת פינצטה. אין צורך להסיר את הדורה מאטר מכיוון שמוט ההזרקה יחדור אליו. בהמשך, שמור על קליפת המוח החשופה מושקה בנוזל מוחי שדרתי. הכן את המזרק על ידי מילוי מזרק של 5 עד 10 מיקרוליטר בשמן מינרלי. לאחר מכן, הכינו את התרופה המעניינת עם צבע במי מלח פיזיולוגיים. כאן, 0.5% שיקגו סקיי בלו מעורבב עם 300 מיקרו-מולרי GABA.

כעת, מלאו את פיפטת ההזרקה על ידי טעינת מזרק של 1 מיליליטר בתמיסה המוכנה, ולאחר מכן השתמשו במזרק כדי להעמיס את הפיפטה. בעת הסרת המזרק, שמור על לחץ קל על הבוכנה, כך שואב אבק לא יסיר את התמיסה מהמזרקה. בדוק אם יש נוזל בורח בנקודות דליפה אפשריות. ספוג את כל הנוזלים העודפים ובדוק שוב אם יש דליפה.

כעת חבר את מזרק המיקרו עם שמן מינרלי למזרק. ואז נגב כל תמיסה עודפת עם גזה. בדוק את קצה ההזרקה. צריך להיות אפשרי להזרים דרכו טיפות קטנות של תמיסה. אחרת, הוא חסום או דולף. כעת, התקן היטב את המזרק למערכת מיקרו משאבות. לאחר מכן הזיזו את מיקום המזרק לקואורדינטות המטרה, והורידו את האלקטרודה לקוליקולוס העליון, אותו ניתן לזהות באמצעות רישום פוטנציאלים מעוררים חזותיים.

בזמן שהאלקטרודה מורידה, הפעל לחץ חיובי קטן על ידי הפעלת קצב הזרקה נמוך כדי למנוע סתימה. הפסק את ההזרקה כאשר מגיעים למבנה. לאחר החדרת המזרק, יש לכסות את קליפת המוח החשופה באגר חם כדי למנוע התייבשות.

לאחר המיקום הסופי של האלקטרודה, המתן 30 דקות כדי לאפשר ייצוב של הרקמה המקיפה את האלקטרודה. לאחר מכן יש להזריק 400 עד 800 ננוליטר של תמיסה בקצב של 40 ננוליטר לדקה, עד להשבתת הפעילות העצבית בקוליקולוס העליון. האלקטרודה אמורה להראות הפחתה בקוצים במהלך הזרקת התמיסה המעכבת.