עטיפת גורם גדילה עצבי בננו-חלקיקים המחקים ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה

קח צינור מיקרוצנטריפוגה המכיל גורם גדילה עצבי או NGF, חלבון נוירוטרופי, ופרוטמין, חלבון נשא טעון חיובית.

קומפלקסים של פרוטמינים עם NGF באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות המאפשרות אנקפסולציה ומונעות פירוק.

לבקבוקון זכוכית, הוסף אתנול המכיל חומרי עזר ליפידים המחקים את הרכב השומנים של ליפופרוטאינים בצפיפות גבוהה או HDL להיווצרות ננו-חלקיקים.

מערבבים עם אתנול נוסף לפיזור אחיד. אידוי אתנול מתחת לחנקן ליצירת סרט שומנים דק.

הוסף מים טהורים במיוחד והומוגניזציה במהירות גבוהה כדי לאפשר הרכבה עצמית לננו-חלקיקי אב-טיפוס המחקים HDL.

הכניסו את קומפלקס ה-NGF-פרוטמין לננו-חלקיקים ודגרו תוך כדי ערבוב כדי לקדם את האנקפסולציה של NGF-protamine תוך שמירה על הפעילות הביולוגית שלהם.

מצננים את התרחיף לייצוב ננו-חלקיקים, ואז מוסיפים אפוליפופרוטאין A-I, החלבון המבני העיקרי של HDL, וממשיכים לערבב כדי לשלב את החלבון במבנה הננו-חלקיקים.

ננו-חלקיקים אלה המחקים HDL טעוני NGF מוכנים כעת למחקרים נוספים.

כדי להתחיל, מערבבים 10 מיקרוליטר של NGF עם 10 מיקרוליטר של פרוטאמין USP בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר, ונותנים לו לעמוד 10 דקות בטמפרטורת החדר ליצירת המתחם. לאחר מכן, הוסף לבקבוקון זכוכית 59 מיקרוליטר פוספטידילכולין ו -11 מיקרוליטר ספינגומיאלין.

הוסף גם 4 מיקרוליטר פוספטידילסרין, 15 מיקרוליטר כולסטרול אולאט ו-45 מיקרוליטר טוקופריל פוליאתילן גליקול סוקסינט. מערבבים ומאדים את האתנול תחת זרם חנקן עדין למשך כחמש דקות. כל חומרי העזר צריכים ליצור סרט שומני ודק בתחתית בקבוקון הזכוכית.

הוסף 1 מיליליטר של מים טהורים במיוחד לבקבוקון, והומוגניזציה ב-9,500 סל"ד למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר כדי ליצור את אב הטיפוס של ננו-חלקיקים או NPs. לאחר מכן, הוסף את הקומפלקס המוכן לאב הטיפוס NPs. דגרו את התרחיף בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, תוך ערבוב, באמצעות מוט ערבוב קטן בבקבוקון הזכוכית.

מצננים את חברי הפרלמנט על ידי ערבוב בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות נוספות. לאחר הקירור, מוסיפים 106 מיקרוליטר אפוליפופרוטאין A-I ומערבבים בטמפרטורת החדר למשך הלילה ליצירת ה-NGF HDL הסופי המחקה NPs.