הזרקה ויראלית סטריאוטקסית לעריכה גנטית עצבית ממוקדת במוח העכבר

אבטח עכבר מורדם במסגרת סטריאוטקסית.

חטאו את הקרקפת המגולחת, ואז בצעו חתך בקו האמצע כדי לחשוף את הגולגולת.

יבש את הגולגולת והחל מי חמצן כדי לשפר את נראות הברגמה.

אתר ברגמה ולמבדה, ולאחר מכן זהה את אתרי היעד.

קדחו בזהירות דרך הגולגולת באתרי המטרה.

חבר את המזרק המלא בנגיף למכשיר הסטריאוטקסי.

הנגיף מקודד Cas9 ו-RNA מדריך יחיד לעריכת גנום בנוירונים משוננים, יחד עם מדווח פלואורסצנטי לסימון נוירונים נגועים.

הורד את המזרק כדי להגיע לפיתול המשונן, ולאחר מכן הזריק את הנגיף לאט כדי להבטיח פיזור אחיד.

הרם את המזרק בהדרגה וחזור על ההזרקה בקואורדינטות נוספות.

עצור לזמן קצר כדי למנוע זרימה חוזרת, ואז משוך את המחט לאט.

חזור על ההליך בחצי הכדור הנגדי.

לבסוף, תפר את החתך.

המודל מוכן כעת למחקרים נוספים.

לגלח את ראשו של עכבר מורדם על מנת להתכונן למקום ההזרקה. יש לכוון 4% איזופלורן לתוך חרוט האף. לאחר מכן, הנח את העכבר במכשיר הסטריאוטקסי. הכניסו את מוט הנשיכה לפיו עד ששיניו נופלות לתוך החריץ לפני אבטחת מוטות האוזניים.

ודא שגוף החיה נמצא על כרית החימום והאף ממוקם בקונוס האף. לאחר מכן, אשר את ההרדמה על ידי צביטה בכף הרגל. לאחר מכן, מרחו דמעות מלאכותיות כדי לשמן את העיניים. לאחר מכן, ספוג את הראש המגולח עם יוד פובידון ולידוקאין.

כעת, בצע חתך קטן לאורך קו האמצע של הקרקפת. יבש את הגולגולת בעזרת ספוגית והחל מי חמצן כדי לעזור לדמיין את הברגמה. בעזרת סקופ ניתוח, אתר את הברגמה על הגולגולת והנח את המקדח מעליה. הגדר את הקואורדינטות הסטריאוטקטיות הדיגיטליות של מישורי x, y ו-z ל-0.

על מנת להבטיח שהראש מפולס על ציר ה-y הזנב הרוסטרלי, הנח את המקדח על למבדה ויישר את הראש כך שקואורדינטת ה-z תהיה שווה בערך ל-0 בברגמה ובלמבדה. כדי להבטיח שהראש מפולס לאורך ציר ה-x, הנח את המקדח על נקודת האמצע בין ברגמה ללמבדה ומדוד את קואורדינטות ה-z במרחק של מילימטר אחד מנקודת האמצע משני הצדדים כדי לוודא שהן שוות.

לאחר מכן, הורד את האיזופלורן ל -2% לפני הנחת המקדחה מעל הקואורדינטות הרצויות, וקדח דרך הגולגולת בזהירות. לאחר קידוח כל החורים, הצמד את המזרק המלא בנגיף על המכשיר הסטריאוטקסי. מרכז את המזרק מעל החור והגדר את קואורדינטת ה-z בגולגולת ל-0. הורד לאט את המזרק לעומק z העמוק ביותר והתחל להזריק בקצב של 0.25 מיקרוליטר לדקה באמצעות מזרק סטריאוטקסי.

לאחר השלמת ההזרקה בעומק z העמוק ביותר, המתן דקה אחת לפני שהרם אותה לקואורדינטה הבאה והתחל שוב בהזרקה. המשך בדפוס זה עד להזרקת כל קואורדינטות הזרקת ה-z. לאחר ההזרקה האחרונה, המתן שתי דקות לפני הוצאת המזרק. לאחר מכן, הסר את העכבר מהמכשיר הסטריאוטקסי ותפר את הקרקפת. מרחו לידוקאין וקרם אנטיבקטריאלי על מקום הניתוח ותנו תרופות נגד כאבים לפני העברת החיה לתא התאוששות מחומם.