בידוד וטיהור של גליקופרוטאינים אוליגודנדרוציטים רקומביננטיים של מיאלין

MOGtag הוא גליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים רקומביננטי המשולב עם תגי מסיסות וטיהור למחקרי דלקת מוח אוטואימונית ניסיונית.

כדי לבודד MOGtag, השעו תאי חיידקים המבטאים MOGtag במאגר ליזה ודגרו.

אנזימים וחומרי ניקוי במאגר משבשים את שומני הממברנה ופוגעים בדופן התא.

סוניקט כדי לליז את התאים עוד יותר, ולשחרר גופי הכללה בלתי מסיסים המכילים MOGtag.

צנטריפוגה כדי לגלול את גופי ההכללה. השליכו את הסופרנטנט, השעו מחדש את הכדור במאגר ודגרו.

מוסיפים גואנידין הידרוכלוריד, ואז מדגרים כדי להמיס את MOGtag.

העבירו את החלבונים המסיסים על שרף ניקל טעון, ערבבו ודגרו בניעור כדי לאפשר ל-MOGtag להיקשר ליוני הניקל.

צנטריפוגה כדי לגלול את ה-MOGtag הקשור. הסר את הסופרנטנט, השהה מחדש את הכדור במאגר פליטה ודגירה עם טלטול.

אימידזול במאגר הפליטה משחרר MOGtag מהשרף.

שוב צנטריפוגה, אסוף את הסופרנטנט המטוהר המכיל MOGtag, ואחסן אותו להמשך ניתוח.

חלקו את התרביות באופן שווה בין בקבוקי 250 מיליליטר התואמים לצנטריפוגה במהירות גבוהה, ושמרו את הבקבוקים על קרח מנקודה זו ואילך. גלולה את תאי החיידקים ב -22,000 * גרם למשך 15 דקות ב -4 מעלות צלזיוס. השעו מחדש ושלבו את כל כדורי החיידקים בסך הכל 30 מיליליטר של מאגר ליזה. העבירו את הנפח הזה לצינור תחתון עגול של 50 מיליליטר המסוגל לצנטריפוגה במהירות גבוהה.

הנח את השפופרת באמבט מים של 30 מעל