אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:56 דק׳ • August 7th, 2025
קחו עכבר מורדם עם גרעיני שורש גב חשופים L4 ו-L5 המכילים גופי תאי עצב חושיים.
טען פיפטה מיקרו-הזרקה עם מבני RNA מתויגים פלואורופור המווסתים את התחדשות האקסונים וצבע עוקב.
הזריקו את התערובת לתוך ה-DRG.
באמצעות אלקטרודות אלקטרופורציה, הפעל פולסים חשמליים על ה-DRG.
זה משבש את הממברנות של גופי תאי העצב התחושתיים, ויוצר נקבוביות המאפשרות למבנים להיכנס לציטופלזמה, מה שמקל על הטרנספקציה.
תפרו את החתך ואפשרו לעכבר להתאושש.
לאחר מספר ימים, יש להרדים מחדש ולאבטח את העכבר.
בצע חתך לרוחב קו האמצע משמאל. נתח את השרירים כדי לחשוף את העצב הסיאטי.
לרסק את העצב כדי לפגוע באקסונים של נוירונים תחושתיים. סמן את האתר בקשר תפר.
תפרו את החתך ואפשרו לעכבר להתאושש.
המבנים המועברים מכוונים ל-mRNA בגופי תאי נוירונים חושיים DRG, ומווסתים באופן חולף את ייצור החלבון כדי לשפר את התחדשות האקסון החושי לאחר פציעה.
להזרקת DRG, טען את פלסמידי ה-DNA או אוליגוס ה-RNA לתוך פיפטת נימי הזכוכית. לאחר מכן הכנס את קצה פיפטת הזכוכית הנימים בזהירות לתוך ה-DRG. ולהזריק בהדרגה תמיסה של 1 מיקרוליטר של פלסמידים DNA או אוליגוס RNA באמצעות מערכת חלוקת המיקרו-הזרקה תוך תאית.
עבור אלקטרופורציה, צבט את DRG המטרה עם האלקטרודות בעדינות, והחל פולסים חשמליים של 5 ריבועים עם מערכת האלקטרופורציה. לאחר מכן, סגור את השריר, ואז את שכבות העור בתפרי ניילון.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים