טרנספקציה מתווכת אלקטרופורציה של גרעיני שורש הגב של העכבר כדי לקדם התחדשות אקסונים חושיים

קחו עכבר מורדם עם גרעיני שורש גב חשופים L4 ו-L5 המכילים גופי תאי עצב חושיים.

טען פיפטה מיקרו-הזרקה עם מבני RNA מתויגים פלואורופור המווסתים את התחדשות האקסונים וצבע עוקב.

הזריקו את התערובת לתוך ה-DRG.

באמצעות אלקטרודות אלקטרופורציה, הפעל פולסים חשמליים על ה-DRG.

זה משבש את הממברנות של גופי תאי העצב התחושתיים, ויוצר נקבוביות המאפשרות למבנים להיכנס לציטופלזמה, מה שמקל על הטרנספקציה.

תפרו את החתך ואפשרו לעכבר להתאושש.

לאחר מספר ימים, יש להרדים מחדש ולאבטח את העכבר.

בצע חתך לרוחב קו האמצע משמאל. נתח את השרירים כדי לחשוף את העצב הסיאטי.

לרסק את העצב כדי לפגוע באקסונים של נוירונים תחושתיים. סמן את האתר בקשר תפר.

תפרו את החתך ואפשרו לעכבר להתאושש.

המבנים המועברים מכוונים ל-mRNA בגופי תאי נוירונים חושיים DRG, ומווסתים באופן חולף את ייצור החלבון כדי לשפר את התחדשות האקסון החושי לאחר פציעה.

להזרקת DRG, טען את פלסמידי ה-DNA או אוליגוס ה-RNA לתוך פיפטת נימי הזכוכית. לאחר מכן הכנס את קצה פיפטת הזכוכית הנימים בזהירות לתוך ה-DRG. ולהזריק בהדרגה תמיסה של 1 מיקרוליטר של פלסמידים DNA או אוליגוס RNA באמצעות מערכת חלוקת המיקרו-הזרקה תוך תאית.

עבור אלקטרופורציה, צבט את DRG המטרה עם האלקטרודות בעדינות, והחל פולסים חשמליים של 5 ריבועים עם מערכת האלקטרופורציה. לאחר מכן, סגור את השריר, ואז את שכבות העור בתפרי ניילון. יומיים או שלושה לאחר אלקטרופורציה של DRG, הרדמו את העכבר תוך צפק, הדביקו את גפיו על לוח השעם ובצעו חתך של 1 סנטימטר 0.5 סנטימטר לצד שמאל לאורך קו האמצע.

לאחר מכן, חתוך את השרירים, כגון שריר העכוז המקסימלי ושריר הפיריפורמיס לאורך. לאחר מכן חשוף את קטע העצב הסיאטי בין הנקב הסיאטי הגדול יותר לחריץ הסיאטי. מועכים את העצב בעזרת מלקחיים מיקרו-כירורגיים למשך 12 שניות, וסמנו את מקום הריסוק בתפר אפינוירולי ניילון. לאחר מכן, סגור את שכבות השריר והעור בתפר ניילון.