העברה תוך-תקלית של וירוסים במודל עכבר לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית

מלאו מזרק בתמיסה המכילה נגיפים הקשורים לאדנו, או AAV, ולידוקאין, חומר הרדמה מקומי.

הנח עכבר ער במצב שכיבה וכסה את פלג גופו העליון.

החזק את חגורת האגן של העכבר וגלח את הגב התחתון שלו כדי לחשוף את העור. עקר אותו עם יוד ואתנול.

אתר את הפער בעמוד השדרה התחתון ולחץ בעדינות כדי לסמן אותו.

סובב את הזנב כדי ליישר את עמוד השדרה והכנס את המזרק אנכית.

כוונן את הזווית עד שמתרחשת תנועת זנב, המאשרת את כניסת המחט לחלל התוך-תקלי שבו זורם נוזל המוח או CSF.

הזרקו לאט את התמיסה להפצה אחידה.

החלקיקים הנגיפיים נקשרים לתאי עצב, נכנסים פנימה ומשחררים את החומר הגנטי שלהם לתוך הגרעין, מה שמאפשר ביטוי גנים ממוקד.

לידוקאין חוסם באופן זמני אותות עצביים, גורם לשיתוק רגליים לטווח קצר, ומאשר לידה מוצלחת ב-CSF.

פרוטוקול זה מבסס אספקה תוך-תקלית כשיטה יעילה לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית.

לפני תחילת ההליך, חבר מחט בגודל 27 למזרק המילטון בנפח 25 מיקרוליטר ויישר את הקצה המשופע של המחט עם הסולם הנפחי על המזרק, ולאחר מכן טען בזהירות 8 מיקרוליטר של 4 כפול 10 לעותקי הגנום העשירי של תמיסת הנגיף לתוך המזרק, תוך הקפדה על הימנעות מבועות.

לאחר מכן, הניחו עכבר ער בן 30 עד 70 יום, במשקל 12 עד 30 גרם על חתיכת מיטה במצב נוטה במכסה מנוע בטיחות ביולוגית וכסו את פלג הגוף העליון בגזה סטרילית כדי להרגיע את העכבר ולהימנע מנשיכה. אחזו בחוזקה בעכבר בחגורת האגן שלו, עם אגודל בצד אחד והאצבע המורה והאצבע האמצעית בצד השני, תוך שמירה על העור בין חגורות האגן הדו-צדדיות מתוח עם האגודל והאצבע, ולאחר מכן גלחו את הפרווה בין חגורות האגן הדו-צדדיות ועקרו את העור החשוף עם קרצוף על בסיס יוד ואתנול 70%.

לאספקה תוך-תקלית ישירה של תמיסת הנגיף הקשורה לאדנו, משש את החלל הבין חולייתי לאורך קו האמצע בין חגורות האגן הדו-צדדיות והשתמש בציפורן כדי ללחוץ על שקע בעור כדי לציין את החלל הבין חולייתי L5 עד L6. סובב מעט ובעדינות את בסיס הזנב כדי לחשוף את קו האמצע של עמוד השדרה ולהתאים את שיפוע המחט לכיוון ראש החיה. כשהעכבר מקובע היטב למקומו, יישר את המחט לאורך קו האמצע של עמוד השדרה והכנס את המחט בעדינות ואנכית למרכז השקע, תוך שמירה על המזרק במישור סגיטלי מרכזי.

כאשר המחט באה במגע עם העצם, הפחיתו לאט את הזווית לכ- 30 מעלות והחליקו את המחט לחלל הבין חולייתי. תנועת זנב פתאומית היא סימן לכניסה מוצלחת לחלל התוך-דוראלי. כאשר המחט נכנסת לחלל הבין חולייתי, הקצה ירגיש מהודק היטב. הזרקו את תמיסת הווקטור ושמרו על המחט בתוך החלל התוך-דוראלי למשך דקה אחת, ולאחר מכן משכו לאט את המחט בסיבוב כדי למזער את הדליפה.