אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:13 דק׳ • August 7th, 2025
התחל עם עכבר מורדם והחל חומר מרחיב אישונים.
במיקרוסקופ יש לפתוח את העפעף ולהבליט מעט את העין כדי לחשוף את מקום ההזרקה.
מרחו טיפה של תמיסה ויסקו-אלסטית עיניים, ולאחר מכן הניחו כיסוי כדי לדמיין את הרשתית.
בעזרת מחט דקה, צרו חור מאחורי צומת הקרנית-סקלרה, והימנעו מנזק לכלי הדם ולעדשה.
דרך חור מנוקב מראש, הכנס מזרק קהה באופן משיק לחלל התת-רשתית ליד אפיתל הפיגמנט של הרשתית או RPE, התומך בנוירונים ברשתית.
הזרקו את הווקטור הלנטי-ויראלי הנושא את גני המטרה לחלל התת-רשתית.
התבונן בהיווצרות של בלב תת-רשתית עקב הצטברות נוזלים, המאשר העברת וקטור מוצלחת.
סגור בעדינות את העפעף כדי לכסות את מקום ההזרקה ולאפשר לעכבר להתאושש.
ה-lentivirus נכנס ל-RPE באמצעות אנדוציטוזיס, משחרר את החומר הגנטי שלו וממיר אותו ל-DNA המתאים, המשתלב עם הגנום המארח ומאפשר ביטוי גנים.
ראשית, הכינו מזרק מיקרוליטר עם מחט קהה בגודל 33. עקר אותו באמצעות גז תחמוצת אתילן. לאחר מכן, הכינו דילול של הווקטורים הוויראליים ב-PBS בצינור מיקרו-פוגה בכמיליון יחידות טיטר למיקרוליטר. כעת, בעת טעינת המזרק, יש לשטוף אותו מספר פעמים בתמיסה כדי להסיר שטח מת במזרק. קבל 1.5 עד 2 מיקרוליטר מוכנים להזרקה.
עם הזרקת הווקטור הנגיפית מוכנה, יש להרדים עכבר בוגר בהזרקה תוך-צפקית של טילטמין, זולאזפאם וקסילזין. ודא שהחיה הורדמה על ידי היעדר רפלקסים. לאחר אישור ההרדמה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים