אספקת siRNA ממוקדת לתאי עצב להשתקת חלבון פריון באמצעות קומפלקסים ליפוזומליים

התחל עם RNA מפריע קטן המדכא ביטוי חלבון פריון, חלבון הקשור למחלות פריון ניווניות.

הוסף תרחיף ליפוזום קטיוני.

ה-siRNA בעל המטען השלילי נקשר למשטח הליפוזום הטעון חיובית.

הציגו פפטיד RVG-9r, גליקופרוטאין של נגיף הכלבת המחובר לזנב פוליארגינין.

שאריות הארגינין מקלות על קשירת RVG-9r-siRNA.

הזרקו את קומפלקסי הליפוזום-siRNA-פפטיד לווריד הזנב של עכבר מורדם.

LSPCs מסתובבים בזרם הדם ומגיעים למוח.

פפטיד RVG-9r נקשר לקולטני אצטילכולין ניקוטיניים בתאי אנדותל, ומפעיל טרנסציטוזיס בתיווך קולטנים על פני מחסום הדם-מוח.

בתוך המוח, RVG-9r נקשר לקולטני אצטילכולין עצביים, מה שמקל על אנדוציטוזיס LSPC ושחרור siRNA.

קומפלקס ההשתקה המושרה על ידי RNA נקשר ל-siRNA.

גדיל הנוסע מתנתק, בעוד שגדיל המנחה נקשר ל-PrP mRNA וחותך אותו, מונע תרגום ומפחית את ביטוי ה-PrP.

הוסף 20 מיקרוליטר מתרחיף ליפוזום 4 ננומול ל-200 מיקרוליטר של תמיסת siRNA של 20 מיקרו-מולאר, ודגר במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן הוסיפו 80 מיקרוליטר של מלאי של 500 מיקרו-מולרי של פפטיד מכוון RVG-9r לתמיסת הליפוזום siRNA, ודגרו במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר הרדמת עכבר באמצעות 2 עד 3% איזופלואורן בחמצן, כסו את עיני העכבר במשחה עיניים ואשרו את ההרדמה על ידי ביצוע צביטה בבוהן. המשך רק אם אין תגובה. תוך שמירה על הרדמה, הנח את העכבר על גבו או על צדו כדי לגשת לווריד הזנב.

נגב את הזנב עם 70% אתנול, ולאחר מכן השתמש במזרק אינסולין בגודל 26 כדי להזריק 300 מיקרוליטר של LSPCs או PALETS לווריד הזנב. התחל להזריק דיסטלי וזז קרוב אם הווריד קורס או נקרע. הנח את העכבר בכלוב נקי עד שהוא שומר על שכיבה עצם החזה.