אפיון תאי גזע מזנכימליים מהונדסים גנטית ליישומים נוירותרפיים

התחל עם תאי גזע מזנכימליים של עכברים טרנסגניים - תאים מולטיפוטנטיים שמקורם במח העצם.

התאים מתוכננים לבטא GFP וגורמים נוירוטרופיים טיפוליים התומכים בצמיחה ובהישרדות של תאי עצב.

שטפו את התאים עם מאגר וקבעו אותם כדי לשמור על שלמות התאים.

יש לשטוף שוב עם מאגר, ואז להוסיף תמיסה לחדירה של התא והממברנות הגרעיניות ולחסום אתרי קשירה לא ספציפיים.

להציג נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבון סמן התפשטות תאים המתבטא אך ורק בגרעין התאים המתחלקים.

יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

הוסף נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור המכוונים לנוגדנים הראשוניים וצבע קושר DNA כדי להכתים את הגרעינים.

שטפו עם מאגר כדי להסיר ריאגנטים לא קשורים.

טען את הצלחת במערכת הסינון בעלת התוכן הגבוה וצלם תמונות כדי לזהות אותות פלורסנט.

ביטוי סמן התפשטות התאים מעיד על חלוקת תאים פעילה, מה שמרמז על התאמתם של התאים הטרנסגניים ליישומים נוירותרפיים.

כדי לבצע בדיקת התפשטות תאים Ki-67, השתמש במאגר פוספט מולארי 0.1 כדי לשטוף את תרביות התאים למשך דקה אחת. לאחר חזרה על הכביסה, השתמש ב-4% פרפורמלדהיד, או PFA, בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות כדי לתקן את התרבויות.

לאחר הקיבוע, הסר את ה-PFA והשתמש ב-PBS כדי לשטוף את הבארות שלוש פעמים במשך שבע דקות כל אחת. לאחר חסימת התאים על פי פרוטוקול הטקסט, יש למרוח 100 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים ראשונית על כל