העברת גנים בסיוע אלקטרופורציה משובצת אגרוז באבות אבות בין-עצביים בקליפת המוח של עכברים

מלאו מיקרופיפטה בתערובת DNA המכילה וקטורי פלסמיד הנושאים את הגן המעניין וצבע מעקב. אבטח אותו במיקרומניפולטור.

מקם גוש אגרוז מתחת למיקרוסקופ והניח פרוסת מוח עוברית של עכבר משובצת באגרוז עם אינטרנוירונים קליפת המוח מעליה.

הורד את המיקרופיפטה והזריק את תערובת ה-DNA לאזור האב הבין-נוירוני. צבע המעקב מסמן את אתר ההזרקה.

מקם בלוק אגרוז נוסף על אלקטרודת צלחת פטרי ועמוד אגרוז על אלקטרודת הכיסוי.

העבירו את הפרוסה אל הבלוק ויישרו את אלקטרודת הכיסוי מעל אתר ההזרקה.

הפעל פולסים חשמליים קצרים כדי לחלחל את קרומי התאים באופן זמני, ולאפשר לפלסמידים להיכנס לגרעין.

דגרו את הפרוסה במדיום כדי לשמור על כדאיות התא.

בתוך הגרעין, הפלסמיד מפעיל ביטוי גנים, מייצר את חלבון המטרה ומווסת את תפקודי האב הבין-נוירוניים.

לצורך ההזרקה, ערבבו את ה-DNA של וקטור הביטוי והבקרה בריכוז של 1 מיקרוגרם למיקרוליטר עבור כל וקטור, והוסיפו תמיסת מלאי ירוק מהיר בדילול של 1 עד 10. מלאו מיקרופיפטה זכוכית בקוטר פנימי של 0.5 מילימטר, קוטר חיצוני של 1 מילימטר עם 10 מיקרוליטר מתערובת ה-DNA, וטענו את המיקרופיפטה למזרק משאבת פיקו פנאומטית. הניחו את גוש האגרוז הגדול יותר מתחת לסטריאומיקרוסקופ, והניחו את הפרוסה להזרקה על חתיכת האגרוז.

לאחר מכן, הזרקו 25 עד 50 נפחי ננוליטר לאזור הבולטות הגנגליוני המדיאלי או הזנב שנבחר של הפרוסה. מיד לאחר ההזרקה, הנח את גוש האגרוז הקטן על אלקטרודת צלחת הפטרי, והשתמש במיקרו מרית שטוחה כדי לחבר את עמוד האגרוז לאלקטרודת הכיסוי הניידת.

העבירו את הפרוסה המוזרקת עם הממברנה התומכת שלה על גוש האגרוז, והניחו את האלקטרודה העליונה עם עמוד האגרוז על גבי האזור הנבחר של הפרוסה. לאחר מכן צלחו את האזור בשני פולסים של 5 אלפיות השנייה של 125 וולט, בהפרש של 500 אלפיות השנייה. לאחר האלקטרופורציה, הניחו את הפרוסה עם הממברנה התומכת שלה בחזרה לתוך צלחת האחיזה שלה והחזירו את המנה לחממת תרבית הרקמות.